为何零假设检验对TolDC诱导的T细胞抑制具有重要意义？

零假设检验可确保在TolDC作用后观察到的T细胞增殖减少具有统计学显著性，从而支持可靠的目标验证，并减少免疫调节研究中的假阳性结果。

在DC治疗中，自变量的分离如何契合发现流程？

分离免疫调节剂对树突状细胞的作用可阐明其作用机制，从而精确归因下游T细胞反应，并为早期化合物筛选提供依据。

基于CFSE的定量T细胞检测在免疫学工作流程中能够实现什么？

定量CFSE强度测量可提供关于T细胞增殖的客观数据，能够直接比较免疫调节效应，并支持免疫调节研发流程中基于数据的推进决策。

为何在TolDC与T细胞共培养研究中，重复性要求至关重要？

重复实验可确保免疫抑制研究结果的可重复性和可靠性，有助于跨职能协作，并增强对用于项目推进的数据的信心。

在实施TolDC功能检测之前，需要具备哪些统计分析能力？

稳健的统计分析，包括CFSE强度分布的比较和显著性检验，对于验证免疫调节效应并支持可操作的研发决策至关重要。

免疫调节药剂对树突状细胞与CD4+ T细胞相互作用的影响

JoVE Encyclopedia of Experiments

免疫学

0 次观看 • 2:40 分钟 • July 8th, 2025

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首先将免疫调节药理学试剂加入未成熟树突状细胞（DCs）中。

树突状细胞表达主要组织相容性复合体（MHC）II类分子和共刺激分子，这些分子在免疫应答中对促进T细胞增殖至关重要。

该免疫调节剂与树突状细胞（DC）相互作用，触发MHC II类分子和共刺激分子表达的下调，从而将DC转化为耐受性树突状细胞（TolDC）。

将耐受性树突状细胞（TolDCs）与初始CD4+ T细胞进行共培养。

向共培养体系中加入抗原肽。

TolDCs 内化该肽段，随后加工并将其产生的抗原加载至 MHC 分子上。

结合抗原的MHC分子转位至细胞膜。

初始CD4+ T细胞直接与耐受性树突状细胞（TolDCs）上的抗原-MHC复合物相互作用。

与成熟树突状细胞上的共刺激分子相互作用，可实现对初始T细胞的完全活化。

如果没有共刺激信号，初始型CD4+ T细胞将保持静息状态，无法针对所呈递的抗原启动免疫应答。

将细胞重悬于浓度为每毫升2 × 10⁵个树突状细胞的溶液中，并在37摄氏度条件下，用适当实验浓度的目标三萜化合物处理1小时。

在孵育的最后三分之一阶段，将T细胞重悬于浓度为每毫升1 × 10⁷ 个细胞的溶液中，加入1微摩尔CFSE，在37摄氏度下孵育15分钟。随后用PBS洗涤细胞，并调整体积至最终浓度为每毫升2 × 10⁶ 个T细胞。

在96孔板的每个孔中，将100微升经处理的树突状细胞与100微升CFSE标记的CD4阳性T细胞共培养，并向细胞中加入100纳克/毫升的OVA肽322-329，孵育2至3天后通过流式细胞术检测T细胞的CFSE荧光强度。