使用超滤装置浓缩细菌培养滤液中的蛋白质

取一个大容量离心过滤装置，其含有合适孔径的垂直再生纤维素膜。

加入缓冲液并离心。弃去含有膜润湿剂的流穿液。

将含有可溶性蛋白和细胞外囊泡（EVs）的细菌培养滤液蛋白（CFP）加入装置中——EVs 是细菌分泌的、含有生物分子的纳米级脂质包被结构。

离心过程中，CFP沿膜表面切向通过 通过 离心力

小于膜孔径的生物分子随培养液穿过膜，而较大的分子（如细胞外囊泡）则通过膜表面，从而最大限度地减少膜堵塞。

该滤膜在死体积的辅助下将CFP浓缩至最小装置体积，防止生物分子干燥。

加入缓冲液并离心。

缓冲液可替换残留的培养基成分，为CFP生物分子创造等渗环境，从而维持其完整性。

将浓缩杯置于滤杯上方，倒置后离心。收集浓缩的CFP截留液用于后续分析。

首先，通过加入完全体积的磷酸盐缓冲液（PBS）来准备一个截留分子量为100千道尔顿的离心过滤器。在4摄氏度下以2,800 × g 离心5分钟。弃去滤过液及任何残留的PBS，并将结核分枝杆菌CFP（Mtb CFP）加至样品室的最大容量。在4摄氏度下以2,800 × g 离心，直至体积减少至超滤装置的最小体积。根据需要重复此步骤，直到整个样品充分浓缩。

向含有浓缩液的滤器单元中加入 1× PBS，直至达到装置的总容量。按照之前所述方法减少体积，并重复此步骤五次，以确保彻底洗涤和缓冲液置换。然后，根据超滤装置的说明书回收 100 千道尔顿截留的 CFP 截留液（即 100R）。用最小体积的 1× PBS 至少洗涤滤膜三次，并将洗涤液与 100R 一同收集，以最大化回收率。