0 次观看 • 4:38 分钟 • July 8th, 2025
取一根装有惰性多糖树脂颗粒基质的尺寸排阻色谱柱。这些多孔颗粒具有特定的孔径大小。
用平衡缓冲液冲洗层析柱，以实现最佳纯化效果。
加入由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）培养物制备的浓缩培养滤液——一种致病性细菌。该滤液含有细菌分泌的细胞外囊泡（EVs）及其他可溶性蛋白质。
细胞外囊泡（EVs）大小不一，呈微小球形结构，包含由脂质双分子层包裹的大分子物质和毒力因子。
样品在重力作用下进入基质。加入缓冲液以促进样品在柱中的流动。
由于树脂孔径较小，EVs无法进入树脂内部，而是通过颗粒间的空隙移动，路径较短，因此最先洗脱出来。
蛋白质由于体积较小，能够进入孔隙，在树脂中经过更长的路径，最后被洗脱出来。
收集含有EVs的组分用于后续分析。
让尺寸排阻色谱（SEC）柱平衡至室温。打开塔式单元背面的电源开关以启动自动进样与流体控制装置（AFC），如有需要，在主菜单触摸屏上按下SETUP以调整称重传感器的设置。在SETUP界面中，依次选择CAROUSEL和CALIBRATE，对样品盘进行校准。将带有13个小孔且孔朝上的样品盘插入AFC塔中，通过按减号或加号按钮调整样品盘位置，使液体喷嘴正好位于冲洗位置的正上方。
取下已平衡的SEC色谱柱的柱帽，将SEC色谱柱插入相应的柱架中，并小心地将其安装到AFC塔上。确保色谱柱上的射频识别标签朝向AFC，并检查色谱柱与阀门之间的连接是否牢固。将废液出口管路放入收集容器中。在SETUP界面中选择Collection Schedule，通过按减号或加号按钮将收集管数量设置为13，每管体积设置为0.5毫升。
保持缓冲液体积设置为默认的 2.7 毫升，然后关闭收集计划窗口。从主屏幕选择开始收集，并通过选择是确认收集参数。将13个已标记且管盖打开的1.7毫升微量离心管放入转盘，管口朝向转盘中心。通过选择确定推进自动进样器。然后安装柱储液槽，并再次按下确定继续。
按下是选择冲洗柱子的选项，并加入一个柱体积的0.2微米滤过的PBS，以去除任何保存缓冲液。冲洗完成后，按下确定推进AFC。将转盘盖盖在AFC上，然后按下确定。使用移液器从柱子中移除多余的缓冲液。用1×PBS将3毫克的100R样品定容至500微升，并将样品加至柱子顶部。
准备一个柱体积的0.2微米过滤的PBS。推进自动进样收集器（AFC），使样品流入筛板。待样品完全进入柱子后，将先前准备好的PBS加入储液池中。在AFC运行过程中，监测其依次收集空隙体积以及指定的组分。运行完成后，当转盘返回废液位置时，取下盖子并从转盘上移除收集管。