一种定量斑马鱼幼鱼真菌感染的技术

取一只在后脑室注射了真菌孢子的斑马鱼幼鱼。

巨噬细胞被募集到注射部位，在孢子周围形成紧密的簇状结构。

孢子被巨噬细胞通过吞噬作用内吞。

这些孢子能够在吞噬体内部抵抗降解，从而使其萌发成菌丝，并诱导巨噬细胞发生坏死性细胞死亡。

菌丝在其表面具有暴露的病原体相关分子模式，即PAMPs。

中性粒细胞被招募到感染部位，识别并结合病原体相关分子模式（PAMPs）。与中性粒细胞接触后，菌丝会触发复杂的高度分支表型，从而阻碍中性粒细胞对其吞噬，促进免疫逃逸。

匀浆化幼虫，释放出有活力的真菌孢子和菌丝。离心去除细胞碎片，将上清液接种于培养基上。

孵育后，计数真菌菌落形成单位或CFUs。

CFU 计数代表逃避免疫系统防御的活真菌孢子数量。

注射后立即取八只幼虫，分别转移至1.7毫升离心管中，并实施安乐死。配制含有氨苄青霉素和卡那霉素的1毫升磷酸盐缓冲液（PBS）。尽可能吸除含有幼虫的离心管中的液体，随后每管加入90微升含抗生素的PBS。

在组织研磨仪中以每分钟1,800次振荡的速度匀浆幼虫，持续6分钟。然后在17,000 × g 条件下离心30秒。用移液器将每管中的匀浆液转移至标记好的GMM平板中央，使用一次性L形涂布棒均匀涂布，注意避免接触平板边缘。将平板倒置于37°C培养2至3天。随后，计数形成的菌落数量。