0 次观看 • 2:58 分钟 • July 8th, 2025
从表达荧光标记免疫细胞的转基因斑马鱼幼鱼开始，这些免疫细胞带有独特的荧光标记，可用于精确定位追踪。
在幼虫的后脑中预先注射表达红色荧光蛋白的Aspergillus孢子。
在后脑中，真菌孢子模拟局部炎症，吸引包括巨噬细胞在内的免疫细胞，巨噬细胞通过吞噬作用清除这些孢子。
尽管少数孢子持续存在并萌发成菌丝，释放病原体来源的分子，吸引中性粒细胞迁移至感染部位。
将麻醉后的幼鱼转移至含有培养基的斑马鱼损伤与捕获装置（zWEDGI）的加样室中，该装置与损伤室相连，用于幼鱼的培养和成像 通过 限制性通道
将幼虫以背侧-外侧方向固定在限制通道中，以便对后脑进行成像。
在早期阶段，红色荧光代表真菌孢子，而绿色荧光证实巨噬细胞被募集至感染部位。
随着时间推移，红色荧光的扩散表明感染的进展，而新增的蓝色荧光则表明中性粒细胞的募集。
成像当天，准备一个含有100微摩尔PTU的3.5毫米培养皿和一个含有E3-三卡因的培养皿。将E3-三卡因加入zWEDGI装置的腔室中，并使用P100微量移液器去除腔室及固定通道中的气泡，然后清除腔室外所有多余的E3-三卡因。
用移液器吸取一条幼虫，转移至含有E3 PTU的培养皿中，然后尽可能少地带液将其转移至E3-三卡因溶液中。30秒后，将麻醉的幼虫转移至损伤与固定装置的加样室中。
从损伤室中移除 E3-三卡因，并将其释放到加载室中，以使幼鱼尾部进入限制通道。确保幼鱼侧向、背向或背外侧朝上放置，以便使用倒置物镜对后脑进行成像。
使用共聚焦显微镜成像后，将 E3-三卡因释放到损伤室中，以推动幼虫从固定通道进入加样室。用移液器吸出幼虫并将其转移回含有 E3-三卡因的培养皿中，然后尽可能少地带液将其转移到含有 E3-PTU 的培养皿中。在 PTU 中清洗幼虫，随后将其重新转移至 48 孔板中。