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在全血样本中,添加针对除中性粒细胞以外的血细胞的特异性抗体复合物。
添加与抗体复合物结合的血细胞结合的磁性颗粒。
将
免疫磁标记的样品转移到微流控芯片的细胞加载端口。
将
磁盘连接到单元加载端口。
磁场吸引免疫磁标记的细胞,将它们捕获到端口的侧壁上。
未标记的中性粒细胞流入芯片并被困在细胞对接区域。
将荧光标记的趋化剂溶液和迁移培养基加入指定的储液器中。液体流经微流体通道,形成浓度梯度。
当趋化剂与中性粒细胞受体结合时,它会引发细胞内变化,导致中性粒细胞重组其细胞骨架并延伸假足。
这些伪足类动物充当脚,推动中性粒细胞走向更高的趋化剂浓度——这一过程称为趋化性。
使用适当的显微镜技术监测中性粒细胞迁移以响应趋化剂梯度。
从
设备中取出去离子水,并从出口中加入 100 微升纤连蛋白溶液。等待三分钟,确保所有通道都充满纤连蛋白溶液。然后,将设备在室温下在有盖的培养皿中孵育一小时。
接下来,从设备中取出纤连蛋白溶液,并从出口加入 100 微升迁移培养基。同样,等待三分钟以确保所有通道都充满迁移介质。在趋化性实验中使用该装置之前,将装置在室温下再孵育一小时。将 10 微升全血放入 1.5 毫升管中。然后,将 2 微升抗体混合物加入中性粒细胞分离试剂盒中的两微升磁性颗粒中,并轻轻混合试管以磁性标记抗体标记的细胞。将标记混合物在室温下孵育五分钟。
接下来,将两个小磁盘连接到设备的单元加载端口的两侧。从设备的所有端口吸出介质。然后,从细胞加载端口缓慢移液两微升标记的血液混合物到微流体装置中。将微流控装置放在37摄氏度的温控显微镜载物台上。等待几分钟,直到足够的中性粒细胞被困在细胞对接区域。
接下来,使用两个移液器将 100 微升趋化剂溶液在 100 微升迁移培养基中加入到指定的入口储液器中。这将通过基于连续层流的化学混合产生趋化剂梯度。化学引诱剂可以是重组蛋白,例如 FMLP,也可以是临床样本,例如 COPD 患者痰液的上清液。
一旦流动稳定,获取通道中FITC葡聚糖梯度的荧光图像。然后,将设备在温控显微镜载物台上或在传统细胞培养箱中孵育 15 分钟。孵育后,对梯度通道进行成像,使用 10 倍物镜记录细胞的最终位置以进行数据分析。