一种使用全血进行快速中性粒细胞趋化性分析的基于微流控芯片的方法

0 次观看3:54 分钟 • July 8th, 2025

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在全血样本中,添加针对除中性粒细胞以外的血细胞的特异性抗体复合物。

添加与抗体复合物结合的血细胞结合的磁性颗粒。

免疫磁标记的样品转移到微流控芯片的细胞加载端口。

磁盘连接到单元加载端口。

磁场吸引免疫磁标记的细胞,将它们捕获到端口的侧壁上。

未标记的中性粒细胞流入芯片并被困在细胞对接区域。

将荧光标记的趋化剂溶液和迁移培养基加入指定的储液器中。液体流经微流体通道,形成浓度梯度。

当趋化剂与中性粒细胞受体结合时,它会引发细胞内变化,导致中性粒细胞重组其细胞骨架并延伸假足。

这些伪足类动物充当脚,推动中性粒细胞走向更高的趋化剂浓度——这一过程称为趋化性。

使用适当的显微镜技术监测中性粒细胞迁移以响应趋化剂梯度。

设备中取出去离子水,并从出口中加入 100 微升纤连蛋白溶液。等待三分钟,确保所有通道都充满纤连蛋白溶液。然后,将设备在室温下在有盖的培养皿中孵育一小时。

接下来,从设备中取出纤连蛋白溶液,并从出口加入 100 微升迁移培养基。同样,等待三分钟以确保所有通道都充满迁移介质。在趋化性实验中使用该装置之前,将装置在室温下再孵育一小时。将 10 微升全血放入 1.5 毫升管中。然后,将 2 微升抗体混合物加入中性粒细胞分离试剂盒中的两微升磁性颗粒中,并轻轻混合试管以磁性标记抗体标记的细胞。将标记混合物在室温下孵育五分钟。

接下来,将两个小磁盘连接到设备的单元加载端口的两侧。从设备的所有端口吸出介质。然后,从细胞加载端口缓慢移液两微升标记的血液混合物到微流体装置中。将微流控装置放在37摄氏度的温控显微镜载物台上。等待几分钟,直到足够的中性粒细胞被困在细胞对接区域。

接下来,使用两个移液器将 100 微升趋化剂溶液在 100 微升迁移培养基中加入到指定的入口储液器中。这将通过基于连续层流的化学混合产生趋化剂梯度。化学引诱剂可以是重组蛋白,例如 FMLP,也可以是临床样本,例如 COPD 患者痰液的上清液。

一旦流动稳定,获取通道中FITC葡聚糖梯度的荧光图像。然后,将设备在温控显微镜载物台上或在传统细胞培养箱中孵育 15 分钟。孵育后,对梯度通道进行成像,使用 10 倍物镜记录细胞的最终位置以进行数据分析。

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最后更新:1 八月 2026