一种用于研究单核细胞单层中 Fcγ 受体介导吞噬作用的检测方法

从红细胞（RBCs）开始。

加入针对红细胞表面抗原的多克隆抗体。

孵育。抗体通过特异性结合红细胞表面抗原，包被红细胞，从而发挥调理作用。

离心并去除未结合的抗体。

将重悬的抗体调理的红细胞加入含有单核细胞单层的多孔载玻片中。孵育。

单核细胞表面的 Fc γ 受体可与结合在红细胞上的多克隆抗体的 Fc 区域结合。 

这种结合会导致Fc受体在接触区域周围聚集，并触发细胞内信号传导，从而引起单核细胞内肌动蛋白细胞骨架的重组。

这种细胞骨架重排会诱导伪足延伸，并在调理过的红细胞周围形成吞噬杯。

吞噬杯逐渐包裹被调理的红细胞，最终将其完全内化至由膜包被的吞噬体中。

孵育后，用缓冲液洗涤载玻片以去除未被吞噬的红细胞，然后固定细胞。

使用封片剂封片。

采用相差显微镜观察并定量单核细胞内吞噬的红细胞。

为了调理R₂R₂红细胞，首先用PBS将红细胞洗涤三次。第三次离心后，将R₂R₂沉淀物与人血清中的多克隆抗-D抗体按1:1比例稀释，在3摄氏度下孵育一小时，期间间歇性混匀。调理结束后，从孵育箱中取出细胞，然后如前所述再用PBS洗涤三次。

将沉淀重悬于完全RPMI培养基中，使其体积比达到1.25%。随后，在37摄氏度条件下，将八孔载玻片各孔中的上清液替换为400微升经调理的R₂R₂细胞，孵育2小时。孵育结束后，使用载玻片适配器移除小室，并用纸巾轻轻吸去多余的R₂R₂细胞。

现在，取一个100毫升的烧杯，装入PBS，将每张载玻片缓慢浸入盐溶液中30至40次，以去除大部分未被吞噬的R₂R₂。干燥后，将载玻片置于100%甲醇中固定45秒，待细胞干燥后，用盖玻片封片。

第二天，将每张载玻片置于配备40倍物镜的相差显微镜下，用双手各持一个计数器，手动计数至少200个单核细胞以及每个单核细胞内吞噬的R₂R₂数量，以同时定量每份样本中单核细胞的数量和每个单核细胞吞噬的R₂R₂细胞数量。