一种用于评估CAR T细胞效力的实时体外细胞溶解检测方法

从含有细胞培养基的 E-Plate 开始——这是一种每个孔底部都带有金微电极的板。

将靶向癌细胞接种到培养板中，使其附着在金微电极上，在电极之间形成物理屏障。

将培养板转移至细胞分析仪，并施加电信号。

贴壁细胞会阻碍电极之间的电子流动，导致电子流动受阻，这种现象以阻抗值进行测量。

随着这些细胞增殖并附着于电极表面，电学阻抗随贴壁细胞数量成比例增加，从而实现对细胞的实时测量。

介绍表达嵌合抗原受体的嵌合抗原受体T细胞，即CAR T细胞。这些受体可与癌细胞的抗原相互作用，激活T细胞，并形成免疫突触。

活化的CAR T细胞会释放细胞毒性物质，包括穿孔素和颗粒酶。

穿孔素在癌细胞膜上形成孔道，促进颗粒酶进入细胞并诱导细胞溶解。

这会促进细胞脱离，降低电学阻抗，与CAR T细胞的细胞溶解能力相关。

进行实时细胞裂解效力检测时，向E-板的每个孔中加入50至100微升靶细胞培养基，然后在细胞分析仪中测定背景阻抗。

使用胰蛋白酶将靶向癌细胞从培养皿上分离。用15毫升新鲜培养基洗涤细胞，并进行离心。将癌细胞沉淀重悬于5毫升新鲜培养基中，计数后调整细胞密度至适当的靶细胞浓度。将细胞加入适当数量的孔中，并将E-板在室温下静置30分钟，以使细胞均匀沉降到孔底。

平衡期结束后，将培养板放入实时细胞分析仪中，并启动自动测量，每15分钟记录一次阻抗，持续过夜。可实时监测目标细胞的贴壁与增殖情况。

次日早晨，将效应 CAR 细胞和对照 T 细胞分别稀释至各试管中的适当浓度，并从 E 板的每孔中移除 50 至 100 微升，使每孔终体积为 100 微升。接着，按照适当的效应细胞与靶细胞比例，将效应细胞和对照 T 细胞加入相应孔中，每孔培养基体积为 100 微升。然后，将培养板在室温下平衡 30 分钟，再将培养板放回细胞分析系统中。

为了评估T细胞介导的对靶向癌细胞的杀伤效果，需监测CAR-T细胞介导的杀伤作用持续96小时。