0 次观看 • 5:16 分钟 • July 8th, 2025
首先将测试疫苗抗原加入树突状细胞培养物中。
树突状细胞识别抗原并将其内化 通过 受体介导的内吞作用将其裂解为较小的肽段，并将产生的抗原-MHC复合物转运至细胞表面进行呈递。
将抗原呈递性树突状细胞与初始T淋巴细胞共培养，以促进T细胞受体与抗原-MHC复合物及其共受体之间的相互作用。
这会促进免疫突触的形成， 活化T淋巴细胞 通过 细胞内信号转导
活化的T淋巴细胞经历克隆扩增，产生效应T淋巴细胞。
向培养物中加入白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）细胞因子分子并进行孵育。IL-2 的结合可触发细胞内信号传导，促进淋巴细胞的增殖与存活。
取少量培养物进行离心，弃去上清液。用抗原呈递性树突状细胞重悬细胞沉淀，并将其转移至同一孔中。
用抗原再次刺激可增强淋巴细胞增殖。
进行下游分析，以定量与淋巴细胞增殖相关的特定标志物。
为制备抗原致敏的MoDCs，向24孔板中每1毫升初始MoDC培养物加入1微升/毫升的狂犬病病毒疫苗或RV悬液，在5%二氧化碳、37摄氏度条件下培养48小时。第7天，将含有抗原致敏MoDCs的24孔板置于冰上10分钟，随后每孔加入1毫升预冷的PBS，充分混匀。将悬液转移至15毫升离心管中。
用 2 毫升预冷的 PBS 洗涤各孔。收集每孔中的残留细胞，并将洗涤后的细胞转移至相应的离心管中。将细胞悬液在 500 g 条件下离心 7 分钟。弃去上清液后，将抗原脉冲的 MoDCs 细胞沉淀重悬于完全培养基中，调整细胞终浓度为每毫升 100,000 个细胞。
进行MoDC与淋巴细胞共培养时，在抗原刺激后的第7天，向无菌的24孔板中每孔接种1毫升初始淋巴细胞悬液和1毫升经抗原刺激或未刺激的MoDC悬液。培养2天后，向每孔中补充20纳克/毫升重组白细胞介素-2，并继续培养120小时。
第14天，将共培养物1毫升转移至无菌的1.5毫升离心管中，并对离心管进行离心。随后，用1毫升抗原致敏或未致敏的MoDCs重悬细胞沉淀。充分混匀后，将细胞悬液转移至对应的孔中。
对PBMCs以及初始淋巴细胞和单核细胞进行细胞表面染色后，用移液器将1毫升细胞悬液转移至无菌的1.5毫升离心管中，在500 g 条件下离心10分钟。随后，将沉淀重悬于1毫升PBS中，并转移至15毫升离心管中。同时，用1毫升PBS收集残留细胞及相应管中的细胞。然后，向含有细胞的15毫升离心管中加入10毫升PBS，并用移液器吹打混匀。
离心850 × g 7分钟 克， 移除上清液，并用倾倒上清后残留的少量悬浮液小心重悬细胞沉淀。将细胞悬液转移至V型底96孔板中，密封各孔以防止洒漏。
染色完成后，进行流式细胞仪分析。根据实时预览，调整包括电压、增益和细胞大小在内的荧光阈值，最终在目标细胞群周围绘制门控，同时排除任何细胞碎片。