一种用于评估血细胞重新黏附至造血囊的血细胞干扰检测法

0 次观看 • 2:19 分钟 • July 8th, 2025

从含有玻璃珠和表达荧光标记血细胞的二龄Drosophila幼虫的离心管开始——这些血细胞是昆虫的血细胞,包括循环血细胞和定居血细胞。

定居的血细胞附着在造血囊——即血细胞生成的微环境——上。

机械性地扰动幼虫,使驻留的血细胞从造血 pockets 释放到循环系统中。

恢复期间,常驻血细胞的受体与造血囊相互作用并重新附着。

恢复后,将一条幼虫放入特制的玻璃载片孔中,并在腹侧的前端和后端进行切口,释放循环血细胞。

洗涤以去除残留的循环血细胞;将同一幼虫转移至新的孔中,并进行刮擦以分离定居的血细胞。

在荧光显微镜下,计数释放的循环和驻留血细胞。

随着干扰后恢复时间的延长,循环血细胞减少,而定居血细胞较恢复初期增加,表明其重新附着于造血区域。

为机械扰动常驻血细胞,选取四至八只幼虫,放入含有约0.5克600微米玻璃珠和0.5毫升水的2毫升微量离心管中。用手以速度10涡旋震荡管子1分钟。

将微量离心管中的内容物倒入培养皿中,用画笔挑出幼虫,从而从玻璃珠中回收幼虫。在恢复阶段,将幼虫置于预先准备好的培养皿中,培养皿内含有薄层果蝇食物。将幼虫孵育45分钟,使其重新建立血细胞分布模式。恢复期结束后,继续进行放血-刮取解剖操作。

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