0 次观看 • 3:17 分钟 • July 8th, 2025
将培养基和经受体破坏酶处理并进行系列稀释的抗血清加入哺乳动物细胞单层中,以防止病毒的非特异性结合。
加入流感病毒悬液。针对病毒蛋白的抗血清抗体与病毒结合,中和病毒并阻止其进入细胞。
低水平的中和抗体浓度或非中和性抗体导致病毒抗原结合无效,从而使病毒能够附着于细胞受体。
弃去培养基,加入含纤维素的培养基,形成半固体覆盖层。
病毒利用宿主细胞的机制形成病毒颗粒并导致细胞裂解。
覆盖层限制了病毒的移动,促进局部感染,并在细胞单层中形成孔洞。
移除覆盖层。固定并通透细胞。
用缓冲液洗涤。加入可结合通透化细胞内病毒抗原的抗体。
用移液器加入与一抗结合的辣根过氧化物酶标记的二抗。
加入过氧化物酶底物和过氧化氢,产生蓝色产物。
对病毒感染的细胞群体进行成像,以评估其在抗血清不同稀释度下的反应。
通过确定抗血清稀释度对感染细胞群的特定抑制程度,以测定中和滴度。
为进行病毒中和实验,需提前两到三天制备细胞单层,然后向板的每孔中加入 50 微升 VGM。分别使用第 11 列和第 12 列作为病毒对照和细胞对照。向第 1 至第 10 列的第一行各孔中加入 50 微升 1:20 稀释的受体破坏酶或经 RDE 处理的血清等分试样。
通过将50微升液体从A行逐行稀释至H行,并从H行弃去50微升,进行两倍系列稀释。然后,向细胞对照列的每孔中加入50微升稀释液。除细胞对照列外,向板内其余每孔加入50微升病毒。将板在37摄氏度孵育2至3小时。随后,移除接种物,并向每孔加入覆盖液。将板在37摄氏度静置过夜孵育。然后对板进行固定和染色。
为了定量中和作用,将培养板放入平板扫描仪的扫描区域。扫描培养板并运行培养板读数软件,以计算所需的病毒滴度。
本文介绍了一种利用哺乳动物细胞单层定量病毒中和作用的方法。该过程包括使用经受体破坏酶处理的抗血清,随后检测病毒感染水平。
定量病毒中和实验为评估抗体在抗病毒药物研发中的有效性提供了关键数据。通过测定功能性中和滴度,这种基于成像的方法有助于在抗病毒药物发现项目中进行靶点验证和先导分子筛选。该实验通过将抗体结合与功能性病毒抑制关联起来,实现机制层面的风险评估,从而在研发早期为决策提供依据。
该检测适用于从早期命中验证到先导化合物优化的抗病毒药物发现工作流程,支持基于数据的推进决策。
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最后更新:29 八月 2026