使用基于图像的微量中和测定分析病毒之间的抗原关系

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将培养基和连续稀释的受体破坏酶处理的抗血清添加到哺乳动物细胞单层上,防止非特异性病毒结合。

添加流感病毒混悬液。抗血清抗体对病毒蛋白具有特异性,可结合、中和病毒并阻止细胞进入。

低中和抗体浓度或非中和抗体使病毒抗原结合无效,从而使病毒附着在细胞受体上。

丢弃介质。涂上含纤维素的介质,形成半固体覆盖层。

该病毒利用宿主细胞机制形成病毒颗粒并引起细胞裂解。

覆盖层限制病毒运动,促进局部感染并在细胞单层上形成孔洞。

移除覆盖层。固定和透化细胞。

用缓冲液洗涤。在透化细胞内添加结合病毒抗原的抗体。

移液辣根过氧化物酶偶联的二抗与一抗结合。

引入过氧化物酶底物和过氧化氢,产生蓝色产物。

孔进行成像,以根据抗血清稀释液量化病毒感染的细胞群。

确定表明受感染细胞群中特定减少的抗血清稀释液,以确定中和滴度。

要进行病毒中和,请提前两到三天准备细胞单层,然后向板的每个孔中加入50微升VGM。分别使用第 11 列和第 12 列进行病毒对照和细胞对照。将 50 微升等分试样的 1/20 稀释液受体破坏酶或 RDE 处理的血清加入第 1 至 10 列的第一行。

通过将

50 微升从 A 行转移到 H 行,并丢弃 H 行中的 50 微升,进行两次连续稀释。然后,向细胞对照柱的每个孔中加入 50 微升稀释剂。将 50 微升病毒添加到板的每个孔中,细胞对照柱除外。将板在 37 摄氏度下孵育两到三个小时。然后,取出接种物并将覆盖层添加到每个孔中。将板在37摄氏度下不受干扰地孵育过夜。然后,固定并染色盘子。

为了量化中和,请在平板扫描仪的扫描区域放置一个孔板。扫描板并运行孔板阅读器软件以计算所需的病毒滴度。

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Last updated: 4 July 2026