一种用于检测病毒抗体依赖性增强感染的体外实验方法

取一块含有针对寨卡病毒抗体的血清样本连续稀释液的微孔板。

加入登革热报告病毒颗粒（RVPs），并进行孵育。

经改造的RVPs包含一个带有结构蛋白的包膜和一个含有编码荧光蛋白的基因组 RNA的核衣壳。

登革病毒和寨卡病毒包膜蛋白的结构同源性导致抗体与RVPs发生交叉反应，形成复合物。

加入不能被RVPs感染的人类白血病细胞。

这些细胞具有可识别RVP结合抗体的Fc受体，从而促进RVP进入内体——这一过程称为抗体依赖性增强作用（antibody-dependent enhancement, ADE）。

离心收集细胞，弃去含有未内化RVPs的上清液。加入生长培养基并孵育。

pH依赖性的RVP与内涵体膜融合会释放核衣壳，核衣壳解离后释放基因组RNA，从而实现荧光蛋白的表达。

固定细胞，并使用流式细胞术进行分析。

在合适的抗体浓度下，较高的荧光强度代表RVP内化增加，表明感染增强。

首先在室温下解冻血清样本。解冻后，将每份血清样本的100 µL转移至无菌管中，并在56°C下加热灭活30分钟。

接下来，用预冷的RPMI-10将血清样本进行10倍倍比稀释，稀释范围从1比1至1比1,000。然后将每份稀释后的血清样本各10 µL转移至无菌96孔V型底板的孔中。

接下来，在37摄氏度水浴中解冻登革病毒1、2、3和4型报告病毒颗粒（RVP），确保每个血清样本对应每种RVP的体积约为170微升。解冻后，立即将RVP管转移至冰上。然后用移液器将10微升RVP加入含有血清样本稀释液的孔中，并加入无血清对照孔中。通过上下吹打5至10次充分混匀。

将96孔V型底板转移至培养箱中，在37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育1小时。在96孔V型底板孵育期间，使用70%乙醇清洁生物安全柜表面，并开启紫外灯照射15分钟。

然后，从培养箱中取出一个细胞生长至完全融合的T75培养瓶中的K562细胞。使用无菌5毫升移液管充分混匀细胞，转移5毫升至无菌15毫升锥形管中。接着，从管中取出10微升细胞，与10微升台盼蓝混合后加载到血细胞计数板中。计数细胞并计算细胞总数。以1,200 × g 离心10分钟后，弃去上清液，将细胞重悬于预热的RPMI-10培养基中，调整浓度为每30微升培养基含80,000个细胞。

从培养箱中取出96孔V型底板后，将30微升K562细胞转移至96孔V型底板的每个孔中，并通过上下吹打5到10次充分混匀。然后将该板放回培养箱中孵育1小时。

孵育结束后，以1,200 × g离心培养板 g 5分钟。离心后，将培养板倒置，将孔中的培养基倾倒至含有10%次氯酸钠的容器中。随后，用125微升预热的RPMI-10培养基重悬各孔中的细胞，并按前述条件离心。

倒出最后一次洗涤液后，向每孔加入100微升预热的RPMI 10培养基。用移液器轻轻吹打混匀，然后将培养板置于37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育48小时