评估产细菌素小鼠粪便菌株的抗菌潜力

取含有能产生抗菌肽——细菌素的乳酸菌（LAB）的小鼠粪便悬液，接种于预热的乳酸菌选择性软琼脂培养基中。

将培养基倒入琼脂平板中，形成第一层。

覆盖第二层琼脂并培养。

第一层选择性促进乳酸菌（LAB）的生长，使菌落分泌的细菌素分子能够向外扩散到周围培养基中。

第二层含有无细胞培养基，可促进细菌素的扩散，并防止乳酸菌（LAB）菌落在表面生长。

现在，倒入含有对细菌素敏感菌株的第三层琼脂。

在第三层生长的细菌会接触到从下层扩散而来的细菌素。

细菌素会破坏敏感细菌的细胞膜，扰乱细胞内稳态，导致细胞死亡，在第三层上表现为清晰的透明圈。

测量抑菌圈直径以评估细菌素的活性。

为了计数粪便样本中产生细菌素的细菌细胞，将稀释后的产细菌素菌细胞转移至4毫升预热的MRS软琼脂中。通过涡旋振荡混匀琼脂，然后将菌液倒入MRS 1.5%琼脂平板中。此层称为第一层。

将另外4毫升无细胞的0.8% MRS软琼脂转移至第一层上，以使所有细胞包埋于软琼脂中。此层的作用是防止细胞在琼脂平板表面形成菌落生长。

在无菌操作台中，将培养皿开盖干燥5到10分钟，然后于30摄氏度培养20至24小时，以促进细胞生长和菌落形成。

为了鉴定产生细菌素的菌落，将每块平板对应的40微升过夜培养的适当指示菌株与4毫升预热的软琼脂混合。将混合物倒入平板中。此层被称为第三层。

将平板按之前方法干燥并孵育，以促进细胞生长和菌落形成。产生细菌素的菌落周围会出现明显的抑菌圈。