JoVE 实验百科全书
免疫学
0 次观看 • 5:09 分钟 • July 8th, 2025
将血小板制品放入核黄素和紫外光照射用的储存袋中。
将核黄素分子引入血小板制品中。
将临床相关细菌接种至血小板制品中,并确保充分混匀。
取少量样品并进行连续稀释。
将每种适当的稀释液涂布于合适的琼脂培养基上,并进行培养以测定初始细菌载量。
将血小板制品暴露于紫外光下。
核黄素被细菌细胞吸收,随后与细菌的核酸发生相互作用。
紫外线照射会导致核黄素-核酸复合物发生光降解,从而引起链断裂。这种不可逆的损伤会使细菌失活。
由于血小板缺乏核酸,因此其在治疗过程中不受影响。
处理后,取出血小板样本。
重复进行连续稀释和平板涂布操作,以定量测定处理后的细菌载量。
比较初始和治疗后的细菌载量,以评估核黄素和紫外光处理的疗效。
获取90至360毫升的标准单采人类血小板制品,血小板浓度为每微升0.80至380万个。将血小板袋置于22摄氏度的血小板培养箱中静置至少2小时,随后在使用前以60转/分钟轻轻振荡。
取2毫升的血小板制品样本,在22摄氏度下使用血气分析仪检测,确保pH值高于6.6。使用同一份样本,通过血液学分析仪测定血小板浓度,确保其处于理想范围内。
接下来,将血小板袋置于直接的白色光源下进行目视检查。轻轻挤压血小板袋,观察样本的旋涡状流动模式。如果在挤压血小板袋前后均存在浑浊且不均匀的现象,则不得使用该血小板。
使用管路对接装置,将血小板转移至核黄素和紫外光照射及储存袋中。使用管路封口机移除空的血小板袋,并将其作为生物危害废物丢弃。
接下来,取下500微摩尔核黄素储备液的避光外包装。将核黄素袋无菌对接至处理与储存袋的入口管路,将内容物排入血小板单位中。然后,将核黄素袋和处理袋组件悬挂在核黄素袋上。轻柔地将处理袋中残余的空气压出,进入核黄素袋中。用少量血小板制品冲洗残余的核黄素至血小板袋中。
让核黄素和血小板溶液回流至处理袋中。然后夹闭进液管路,使用管路封口器取下空的核黄素袋,并按规定妥善丢弃空袋。将一段6英寸长、末端带阴性接头的管路在无菌条件下连接到照射与储存袋的进液管路上。
将一个10毫升注射器筒连接到管路线上。接着,向注射器筒中加入5毫升细菌储备悬液。然后打开入口管路夹,使细菌流入血小板制品中。通过让部分血小板制品反向流动来冲洗注射器筒。冲洗后,取下注射器筒。连接一个30毫升注射器,并至少冲洗入口端口两次。
产品充分混匀后,使用一支洁净的5毫升注射器抽取2毫升预处理样品。使用新的注射器除去袋中引入的空气。然后,将进液管从处理袋上取下,并称量血小板溶液的质量。
开始血小板处理时,首先输入操作员编号,然后将血袋安装到照明器载物台上。接下来,使用条形码阅读器输入样本编号。输入产品类型,并将血袋重量录入软件。随后,闭合石英夹具,以自动递送每毫升6.24焦耳的紫外光能量。典型的处理时间为5至10分钟。
同时,对处理前的样品进行滴定。紫外线处理后,对处理后的样品进行滴定以检测细菌
查看完整文字稿并访问数千部科学视频