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免疫学
0 次观看 • 2:17 分钟 • July 8th, 2025
取一个含有经X射线辐照的上皮单层细胞的膜插件。
将膜插件放入含有外周血单个核细胞(PBMCs)的孔中,PBMCs 是可分泌细胞因子及其他信号分子的免疫细胞。
将跨上皮电阻(TEER)电极放入膜插件中。
施加微弱电流并测量电阻,以评估由紧密连接调控的单层细胞通透性。
紧密连接是通过支架蛋白与细胞骨架相连的跨膜蛋白。
这些连接蛋白共同在细胞膜之间形成一道坚固的屏障,限制大分子和病原体的通过。
完整的连接蛋白会阻碍电流通过,导致较高的跨上皮电阻(TEER),表明单层细胞通透性正常。
X射线暴露会降低连接蛋白水平,增加单层细胞通透性,并降低TEER值。
此外,受照射细胞释放的信号分子可激活共培养的 PBMCs,使其分泌细胞因子,进而进一步降低连接蛋白水平并破坏屏障完整性。
因此,单层细胞通透性增加,导致跨上皮电阻(TEER)进一步下降。
为了在照射后立即评估 Caco-2 细胞的跨上皮电阻(TEER),将一半的 Caco-2 细胞培养小室转移至新的培养板中,每孔加入 3 毫升新鲜的完全培养基;另一半培养小室则转移至接种了 2 × 106 个 PBMC 的新培养板中,每孔培养基体积为 3 毫升完全培养基。随后,在照射后的前 6 小时内每小时将 TEER 棒状电极插入细胞培养小室一次,之后每 3 小时插入一次,直至照射后 48 小时。
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