实时评估原代人免疫细胞的抗真菌活性

从含有人中性粒细胞或免疫细胞悬浮液的玻璃成像培养皿开始，并在荧光成像系统下进行可视化。

引入转基因荧光曲霉报告分生孢子或真菌孢子，并定期捕获图像长达 6 小时。

真菌孢子表达红色荧光蛋白，并在外部用不可降解的洋红色荧光团标记——有助于区分死细胞和活细胞。

孵育过程中，中性粒细胞通过模式识别受体与分生孢子上的病原体相关分子相互作用，促进它们在吞噬体内的吞噬。

后来，吞噬体与含酶的溶酶体融合，形成吞噬溶酶体。

吞噬溶酶体内，活性氧和酶降解分生孢子。

在活细胞成像过程中，在初始时间点，中性粒细胞吞噬体内的强烈红色和洋红色荧光表明存在活分生孢子。

随着时间的推移，红色荧光的减少和洋红色荧光的保留表明分生孢子的降解，证实了中性粒细胞的抗真菌活性。

要在显微镜检查期间可视化 DsRed 和 AlexaFlour 633，请预热显微镜加热器并打开显微镜和计算机。接下来，将 100 微升 3 乘以 10 的每毫升 FLARE 分生孢子悬浮液加入到成像皿的适当孔中。记录添加 FLARE 分生孢子的时间。

成像皿安装在显微镜载物台上。然后，在采集设置中，将激光功率设置为 10%，将曝光时间设置为 1 秒，并调整相机灵敏度以获得清晰但不会曝光过度的 DsRed 和 AF 633 图像，并设置舞台点列表。当所有点都聚焦、优化荧光通道并设置周期时间和持续时间时，初始化成像。