原代人类免疫细胞抗真菌活性的实时评估

从含有悬浮人中性粒细胞——即免疫细胞的玻璃成像培养皿开始，在荧光成像系统下进行观察。

引入基因改造的荧光标记Aspergillus报告菌分生孢子——即真菌孢子，并在接种后定期拍摄图像，最长持续6小时。

真菌孢子表达红色荧光蛋白，并在外部分别用不可降解的品红色荧光染料进行标记，有助于区分死细胞与活细胞。

孵育期间，中性粒细胞通过模式识别受体与分生孢子上的病原体相关分子相互作用，促进分生孢子被吞噬进入吞噬体。

随后，吞噬体会与含有酶的溶酶体融合，形成吞噬溶酶体。

在吞噬溶酶体内，活性氧和酶会降解分生孢子。

在活细胞成像过程中，中性粒细胞吞噬体内的强烈红色和洋红色荧光表明存在活的分生孢子。

随着时间推移，红色荧光减弱而品红色荧光保留，表明分生孢子发生降解，从而证实中性粒细胞具有抗真菌活性。

为了在显微镜下观察 DsRed 和 AlexaFluor 633，预先加热显微镜加热板，并打开显微镜和计算机。接着，向成像培养皿的相应孔中加入 100 微升浓度为每毫升 3 × 10⁶ 的 FLARE 分生孢子悬浮液。记录加入 FLARE 分生孢子的时间。

将成像培养皿安装到显微镜载物台上。然后在采集设置中，将激光功率设为10%，曝光时间设为1秒，并调整相机灵敏度，以获得DsRed和AF 633清晰但不过曝的图像，同时设置一系列载物台位置点。当所有位点均处于焦平面、荧光通道已优化，且循环时间与持续时间已设定后，开始初始化成像。