0 次观看 • 3:37 分钟 • July 8th, 2025
从一个含有营养物质的琼脂平板开始，在平板中央放置一滴过夜培养的产抑制剂原代细菌培养物。
让培养物干燥，确保细菌最小程度扩散，然后进行培养。
单个细菌形成明显的菌落，并分泌抗菌化合物——即抑制分子，这些分子在琼脂中扩散至一定距离。
将稀释后的竞争菌株培养液均匀喷洒在含有主菌菌落的琼脂表面。
孵育期间，抗菌化合物与竞争性细菌相互作用，并破坏其关键的细胞过程。
这会导致该特定区域内竞争性细菌的死亡，从而引起细菌生长的显著下降。
在无抗菌化合物的区域，竞争性细菌利用营养物质并形成明显的菌落。
这会形成一种具有明显抑菌圈的差异性生长模式。通过测定该抑菌圈的直径及透明度，评估细菌来源的抗菌化合物的作用效果。
为制备细菌过夜培养物，将竞争菌株和抑制菌株划线接种于无菌BHI琼脂平板上，在37°C有氧条件下培养约18小时。在28毫升通用瓶中，用单个所需竞争菌株的菌落接种10毫升无菌BHI肉汤。
将培养物置于通用轨道摇床中，在 37 摄氏度、250 RPM 条件下过夜培养。次日，确保琼脂平板完全干燥，皿盖上无冷凝水，以防止接种物在平板上扩散。取 25 µL 过夜培养物滴加至琼脂平板中央，加样时避免完全压下移液器枪头，以防产生气泡导致培养物飞溅至琼脂表面。
将培养物在室温下晾干，以限制培养物的扩散。然后将琼脂平板在37°C有氧条件下培养过夜。在生物安全二级柜内（柜内铺有吸水纸）培养过夜后，使用BHI肉汤将培养物稀释十倍，使其浓度约为4 × 10⁶ CFU/mL。随后，将稀释后的培养物倒入无菌的塑料喷雾瓶中。
为进行延迟生长抑制试验，需先将培养物通过每个雾化瓶喷出，以确保培养物已加载至喷雾装置中，然后再喷洒到琼脂表面。从距离琼脂表面约15厘米的高度，将约250 µL稀释后的培养物均匀喷洒在整个琼脂表面上。将平板置于37 °C有氧条件下过夜培养。
为解读延迟性生长抑制现象，需测量喷雾接种的竞争菌株的生长抑制圈直径（单位为毫米），并减去产抑制物菌株中央接种点的直径。最后，根据文字实验方案记录抑制圈的清晰度评分。