一种用于抗病毒化合物筛选的病毒吸附实验

从一个含有预冷的人肝癌细胞单层的多孔板开始。

用携带荧光素酶基因的基因修饰型丙型肝炎病毒与待测化合物的混合物处理实验孔；仅用病毒处理对照孔。

在检测孔中，靶分子与病毒糖蛋白和细胞表面受体相互作用，阻止病毒附着。

然而，在对照孔中，病毒糖蛋白会与细胞表面受体相互作用，从而实现其附着。低温会抑制病毒进入细胞。

去除上清液，加入培养基，并在最适温度下重新孵育，以促进病毒进入。

病毒进入细胞后释放遗传物质，启动病毒蛋白和荧光素酶的合成，这些物质被分泌到培养基中。

转移含有荧光素酶的上清液，并加入底物。

酶与底物的相互作用产生的光与荧光素酶的水平成正比。

与对照孔相比，检测孔中较低的光强度表明目标化合物具有抗病毒特性。

进行病毒吸附实验时，将每孔 1 × 10⁴ 个细胞接种于 96 孔板中，于细胞贴壁条件下孵育过夜。次日清晨，首先将含有细胞单层的 96 孔板置于 4 摄氏度环境中预冷 1 小时。

将测试化合物与病毒混合物置于冰上准备。例如，每孔加入含 10² FFU 病毒的 HCV-CHLA、HCV - 1% DMSO 或阳性对照 HCV-肝素溶液。轻柔地吸去细胞培养孔中的培养基。随后，立即在三个复孔中各加入 100 微升病毒与测试化合物的混合物，注意避免温度升高。将培养板置于 4 摄氏度的冰箱中孵育三小时。

病毒颗粒将在4摄氏度时附着于细胞表面，但不会被内化。接下来，吸除上清液。用200微升预冷的PBS轻柔洗涤细胞两次。每孔加入100微升基础培养基，然后在37摄氏度孵育72小时。最后，为定量检测感染细胞释放的荧光素酶报告蛋白，收集每个样品孔的上清液，并进行海肾荧光素酶（Gaussia luciferase）检测。