一种用于评估受试化合物对宿主细胞中病毒进入和融合影响的检测方法

取肝癌细胞，在低温条件下孵育以抑制内吞作用。

引入一种重组丙型肝炎病毒（HCV），该病毒包含经过基因工程改造的RNA基因组，编码一种分泌型荧光素酶报告基因。

病毒脂蛋白与宿主细胞上的蛋白聚糖相互作用，而病毒包膜糖蛋白则与特定的宿主受体结合。

在选定的孔中，加入可与病毒糖蛋白结合的待测化合物。

在生理温度下孵育时，结合的病毒会被内吞。

弃去未内化的病毒，加入生长培养基并孵育。

在未处理的孔中，糖蛋白促进病毒包膜与内体的融合，从而释放核衣壳；而在经化合物遮蔽处理的孔中，融合过程受到抑制。

释放后，RNA表达病毒蛋白，包括在细胞外分泌的荧光素酶。

收集含有荧光素酶的上清液，并加入一种生物发光底物，该底物被荧光素酶氧化后会发出光信号。

与未处理孔相比，处理孔中发光强度降低表明病毒包膜与内体融合受到抑制。

为检测病毒融合与进入，细胞过夜培养贴壁后，将细胞培养板置于4摄氏度预冷一小时。吸除孔中现有培养基，于冰上用10² FFU HCV感染细胞。

将培养板在 4 摄氏度下孵育三小时。用 200 微升冰浴的 PBS 轻柔洗涤细胞两次，以去除未吸附的病毒。然后，在冰上，用溶解于基础培养基中的待测化合物处理细胞，或以含 1% DMSO 的基础培养基作为对照，随后将培养板在 37 摄氏度下孵育三小时。此过程可用于评估待测化合物对发生在 37 摄氏度下的病毒入侵的影响。

吸弃培养基，用 200 微升柠檬酸盐缓冲液或 PBS 将未内化的病毒洗涤两次。每孔加入 100 微升基础培养基，于 37 摄氏度继续孵育 72 小时。收集上清液，并按照之前所述方法进行 Gaussia 荧光素酶检测，以检测释放的荧光素酶报告分子。