0 次观看 • 2:46 分钟 • July 8th, 2025
取一个含有贴壁生长的间充质干细胞（MSC）培养物的多孔板。
加入外周血单个核细胞（PBMCs），并进行孵育。
MSCs 分泌肝细胞生长因子，诱导单核细胞获得免疫调节表型，产生白细胞介素-10（IL-10）。
将含有 PBMC 的上清液转移至离心管中。
加入针对单核细胞表面标志物 CD14 的抗体包被磁珠。
使用磁性分离器分离 CD14+ 单核细胞，并将其以逐渐增加的浓度加入多孔板的孔中。
引入荧光染料CFSE标记的效应CD4+ T细胞。
加入特异性结合T细胞表面标志物CD3和CD28的抗体偶联微珠，以激活细胞。
在缺乏单核细胞的对照孔中，活化的T细胞发生增殖，每次细胞分裂均使其子代细胞中的CFSE荧光强度降低。
然而，在共培养体系中，间充质干细胞诱导的单核细胞会分泌IL-10，从而抑制效应T细胞的增殖。
通过流式细胞术观察到，随着单核细胞浓度的增加，表现出降低的CFSE荧光强度的T细胞减少，表明MSC诱导的单核细胞抑制了效应T细胞的增殖。
进行效应细胞抑制实验时，首先建立MSC-PBMC共培养体系，将2.5 × 106个PBMC与250,000个MSC共培养，以确保有足够的MSC共培养PBMC用于亚群筛选。
在37摄氏度培养48至72小时后，使用适当的磁珠分选目标MSC诱导的免疫调节性白细胞。然后，在每孔1毫升完全白细胞培养基中，按不同的实验比例加入CFSE标记的同种异体CD4阳性T细胞。
接下来，按1:1的微珠-细胞比例加入与抗CD3/28偶联的微珠，以刺激CD4阳性T细胞。共培养第三天，通过流式细胞术评估CFSE标记的CD4阳性T细胞的增殖情况。