一种评估毒素暴露对微型兴奋性突触后电流（mEPSCs）抑制作用的技术

用逐渐增加浓度的待测毒素处理神经元培养物。

毒素进入细胞并被释放到细胞质中。

根据其作用机制，该毒素可能阻止囊泡融合，从而抑制神经递质的释放。

用含有特定神经药理学化合物的缓冲液替换培养基，以阻断神经元动作电位。

将培养皿置于电生理记录台上。开始记录时，用含有记录电极的移液管与神经元胞体建立连接。

施加稳定的负压以吸取一小部分膜，形成吉欧密封（gigaseal），该紧密密封可确保记录过程中干扰最小。

保持膜电压恒定以测量神经元电流。

施加负压脉冲以破裂膜，建立神经元与移液管之间的直接接触。

记录由于神经递质摄取在神经元中产生的电流，称为微型兴奋性突触后电流（mEPSCs）。

随着毒素暴露增加，mEPSC频率降低表明神经递质释放受到抑制。

将A型肉毒杆菌神经毒素用ESN培养基稀释至所需终浓度的100倍，并预热至37摄氏度。然后，向DIV 21+的ESN培养物中加入适量毒素。轻轻晃动培养皿，放回培养箱中。

在预定时间点，吸除ESN培养基，并用细胞外记录缓冲液（ERB）洗涤两次。随后，加入4毫升ERB，其中添加5 µM河豚毒素以阻断动作电位，以及10 µM荷包牡丹碱以拮抗GABA_A受体活性。接着，将培养皿转移至电生理记录装置。在测量突触传递抑制或进行MIST检测时，无需灌流或温度控制。

使用微量移液器拉制仪将硼硅酸盐玻璃移液管拉制成 5 至 10 兆欧电阻后，用细胞内记录缓冲液从后端填充移液管。随后，将移液管轻轻浸入硅化试剂中。将记录用移液管固定在电极夹持器上，并将装有空气的注射器连接至通入电极夹持器的管路。施加稳定的正压 通过 在将记录电极移入ERB的同时，降低注射器。

轻轻将记录电极置于待记录神经元的胞体表面后，通过推动注射器活塞释放正压以打破电极尖端的封闭状态。重新连接注射器，并通过轻柔抽吸施加持续的负压，以形成吉欧姆（gigaohm）封接。一旦吉欧姆封接形成，将钳制电压降至负70毫伏，然后使用注射器小心施加短暂的负压脉冲，以进入全细胞记录模式。

监测电容尖峰30秒，以确认封接稳定。在hacker软件中消除电容尖峰，然后切换到电流钳模式，以监测并记录静息膜电位。在未校正液接电位的情况下，静息膜电位应在负67至负82毫伏之间。

将增益调节至每皮安2毫伏。切换至电压钳模式，并施加持续的-70毫伏电压，记录3至5分钟以检测微小兴奋性突触后电流。

使用mini-analysis中AMPA受体EPSC的默认设置，分析3至5分钟的记录数据以检测MEPSCs。收集并保存所检测事件的相关信息。在每种暴露条件下，针对8至12个对照样本和8至12个肉毒神经毒素处理样本收集mEPSC频率数据后，将频率数据与年龄匹配且批次匹配的对照组进行比较分析。