Name: 激光捕获显微切割哺乳动物组织 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 34 s
Description: 学习使用Leica A-S-L-M-D激光捕获显微切割系统精确分离哺乳动物组织样本。本方法展示如何从冷冻切片中分离特定细胞区域，用于RNA提取和下游分子生物学分析。

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作者无任何利益冲突需要披露。

哺乳动物组织的激光显微切割

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

激光捕获显微切割，又称激光显微切割（LMD），可使操作者从冷冻或福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中分离出少量细胞或组织。LMD 技术依赖于置于组织切片上方或下方的热敏膜。其中一种方法利用聚焦激光能量将膜熔融至下方细胞表面，随后可将这些细胞从组织切片中提起；另一种方法则通过激光能量沿在组织上“绘制”的路径汽化金属箔，使选定细胞落入收集装置。两种技术均可实现数微米级分辨率的细胞选择。可从显微切割样本中分离并分析 DNA、RNA、蛋白质和脂质。本视频通过七个部分演示了 Leica AS-LMD 激光显微切割仪的使用，包括 LMD 原理简介、仪器初始化、样本制备的一般注意事项、标本安装与捕获管设置、显微镜校准、捕获参数调节以及组织标本捕获。激光捕获显微切割使研究者能够分离出仅相当于数个细胞量级的纯细胞群体样本，从而对目标细胞进行分析，避免邻近细胞污染对实验结果造成干扰。

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激光捕获显微技术，又称激光显微切割（LMD），可使用户从冷冻或...

您好，我叫 Rob Edwards，是加州大学尔湾分校激光显微切割实验室的负责人。接下来我将为您介绍我们这里所使用的激光显微切割仪的使用方法。我们的仪器是 Leica A-S-L-M-D，大约在三年前购入。激光捕获系统有两种不同类型。其中一种类似于点焊装置，即将组织样本置于载玻片上，其上方覆盖一层塑料膜，塑料膜位于组织之上。然后使用激光光源熔化膜，在实质上将组织点焊到膜上，随后移除该膜，从而带走捕获的组织。好的。要启动LCM系统，我们需要按顺序依次打开多个仪器的电源。首先打开此处的A-S-L-M-D控制箱电源。然后打开计算机，操作非常简单。如果您的样本需要使用荧光光学系统来识别待捕获的细胞，则需打开汞灯以提供荧光照明。但本次演示中不会使用该功能。如果要拍摄处理前和处理后样本的高质量图像，可以在打开逻辑盒和计算机后，单独在此处开启点相机；接着在此处打开激光功率控制单元，该单元实际上是由仪器底部后方的钥匙开启的；最后，打开计算机显示器。屏幕上会显示多个需要您熟悉掌握的控制选项。你会经常使用它们。这是一个经典的基于 Microsoft Windows 的程序，因此会涉及多个菜单，我们将逐一讨论。但首先，让我介绍一下这里的桌面。有一个实时窗口，可显示显微镜实际观察到的内容。在上方的菜单栏中，您可以看到一个用于实时成像的按钮，还有一个冻结按钮，可进行切换，然后使用文件菜单来捕获组织某一部分的静态图像，例如在捕获前和捕获后分别记录所分离的组织。显微镜可运行于明场或荧光模式，具体取决于您是在采集经血红素复染的组织还是荧光染色的组织。接下来的两个按钮包括标本模式，该模式聚焦于显微镜载物台的平面；然后是收集模式，该模式将玻片移开，使您能够观察收集管顶部所捕获的组织。这是一种质量控制类型的设置。在菜单栏中接下来的是多种绘图工具，您将使用这些工具来标识希望捕获的组织或细胞区域。然后在屏幕右侧有一些额外的绘图和捕获工具，包括一些绘图形状选项、一些切割选项，以及切割控制按钮。此外，在底部的控制面板上还有收集装置，即显微镜载物台下方的部分，用于容纳收集组织样本的 einor 管。标有 A、B、C 和 D 的这四个按钮用于控制哪一个收集管将被移动到待捕获样本的正下方。这是一个用于激光捕获显微切割的典型冷冻切片组织示例。这些是小鼠胚胎头部的冠状切片，已采集到笔箔载玻片上。这些切片为8 µm厚的冷冻切片，经干燥后用伊红复染，并在使用前于-80 °C保存。因此，将这些玻片安装到显微镜上时，显微镜配备有专用的持载装置，需注意组织将被采集到位于载物台平面下方的艾诺管中。因此，组织位于玻片的这一侧，实际安装时应将玻片有组织的一侧朝下放入持载装置中，如下所示。载玻片卡入该位置，并通过弹簧压力固定。然后保持完整，对准此孔。将载玻片夹置于显微镜载物台上，位于这两个导向装置之间。您会注意到有一个小的卡槽，可

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生物学

激光捕获显微切割哺乳动物组织

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激光捕获显微切割用于RNA分析的多聚甲醛固定小鼠肝组织

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哺乳动物组织的激光显微切割

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