分离脐带血造血干细胞以制备人免疫系统小鼠

从人脐带血细胞开始，包括CD34⁺造血干细胞（HSCs）。

加入抗体以阻断细胞的 Fc 受体，防止造血干细胞特异性磁珠的非特异性结合。

加入针对CD34⁺造血干细胞的抗体包被磁珠。离心后弃去上清液。

将细胞重悬于缓冲液中。通过磁性分离器分离，保留与磁珠结合的造血干细胞（HSCs）；未结合的细胞则流穿。

撤去磁场以收集造血干细胞。

离心并用培养基重悬细胞。接种细胞并进行培养。

该培养基含有促进造血干细胞存活和扩增的生长因子和细胞因子。

收集细胞。加入冻存液，转移至冻存管中，并进行冷冻保存。

为了构建人免疫系统（HIS）小鼠模型，解冻造血干细胞（HSCs），并将其加入预热的培养基中。

离心并将细胞重悬于缓冲液中。

细胞已准备好注射至免疫缺陷小鼠幼崽中，用于人源化免疫系统（HIS）模型的构建。

首先，将从脐带血中分离得到的 CD34 阳性细胞沉淀按每 1 × 10⁸ 个细胞加入 300 微升磁性细胞分选缓冲液重悬。每 1 × 10⁸ 个细胞加入 100 微升 FcR 封闭试剂，随后每 1 × 10⁸ 个细胞加入 100 微升 CD34 阳性磁珠，于 4 摄氏度孵育 30 分钟。

接下来，每 1 × 10⁸ 个细胞加入 5 毫升磁性细胞分离缓冲液，在 4 摄氏度下以 360 g 离心 10 分钟。重复洗涤步骤，并将沉淀物重悬于已标记为“未分级”的 15 毫升锥形管中，每 1 亿个细胞加入 500 微升磁性细胞分离缓冲液。再标记两个 15 毫升试管——CD34 阴性管和 CD34 阳性管。将这三个试管置于冷却架上。

在生物安全柜中，使用自动磁性细胞分选仪的两柱阳性筛选程序分离细胞。接下来，为扩增和冻存 CD34 阳性人干细胞，按照文中的描述制备脐带血或 CB 培养基，并通过 0.22 微米滤器过滤。将 CD34 阳性细胞以每毫升 CB 培养基 100,000 个的密度重悬，并在 37 摄氏度下孵育。

第三天，在培养瓶中加入等体积的不含细胞因子的CB培养基。第五天，收集扩增后的CD34阳性细胞。将细胞悬液轻轻吹打混匀，转移至50毫升锥形管中。加入足量的CB培养基润洗培养瓶底部。使用细胞刮刀刮下培养瓶底部全部细胞，将所有培养液收集至同一50毫升离心管中，随后离心。

将细胞重悬于2毫升CB培养基中，离心。吸除上清液至沉淀物处，再将沉淀物重悬于冻存培养基中。随后，在幼鼠照射后3小时开始CD34阳性细胞的制备。在50毫升离心管中预热10毫升CB培养基。

取出一瓶 在 体外 每四到六只幼鼠注射所用的扩增并冻存的CD34阳性细胞，在50至55摄氏度下快速解冻，直至仅剩少量冰晶可见，将细胞加入预温的CB培养基中。用1毫升培养基冲洗每支冻存管，并以360 × g离心细胞 g 4摄氏度下离心12分钟。

小心吸除培养基。将沉淀重悬于2毫升CB培养基中，计数细胞。再次离心细胞，吸除培养基，然