0 次观看 • 3:52 分钟 • July 8th, 2025
取表达卵清蛋白特异性受体的诱导多能干细胞来源的调节性T细胞（Tregs），注射至固定小鼠的尾静脉中。
细胞到达膝关节囊内表面的滑膜。
接着，给予与佐剂乳化的甲基化牛血清白蛋白（mBSA）。
佐剂增强mBSA向抗原提呈细胞（APCs）的呈递，后者对mBSA进行加工并呈递其片段 通过 MHC 分子
抗原提呈细胞迁移至淋巴结，诱导T细胞活化。活化的T细胞迁移至膝关节。
分别在左膝关节注射 mBSA，右膝关节注射 mBSA 与卵清蛋白。
在左膝关节中，抗原提呈细胞（APCs）将mBSA片段呈递给活化的T细胞，触发促炎性细胞因子的释放，导致组织损伤和关节肿胀，此现象称为关节炎。
在右膝关节中，调节性T细胞（Tregs）与呈递卵清蛋白的抗原呈递细胞（APCs）相互作用，并释放抗炎性细胞因子，从而减轻组织损伤和关节肿胀，进而改善关节炎症状。
首先用胰蛋白酶消化目标细胞培养物，并将每种细胞类型重悬于 10 毫升新鲜培养基中。将每种细胞培养物接种至新的 10 厘米培养皿中，置于细胞培养箱中孵育，使饲养层细胞贴壁。30 分钟后，收集未贴壁的悬浮诱导多能干细胞（iPSCs），并将细胞悬液分别通过 70 微米细胞筛网，以去除细胞团块，然后进行细胞计数。
用预冷的PBS将每种培养物重悬至每毫升1.5 × 107 个细胞的浓度，必要时再次过滤。然后，将4至6周龄的雌性C57BL6小鼠逐只放入小型动物固定器中，每只小鼠尾静脉注射200微升一种类型的细胞悬液。
使用百分表卡尺测量双侧膝关节的肿胀程度，以建立基线值。细胞转移后10天，使用1毫升注射器将100微克甲基化BSA溶于完全弗氏佐剂中，于每只实验动物尾根部进行注射。
在细胞转移后的第17天，对每只经麻醉的过继转移动物，于左侧膝关节内注射含20微克甲基化BSA的10微升PBS，于右侧膝关节内注射含20微克甲基化BSA和100微克全卵白蛋白的10微升PBS，以诱导关节炎。
诱导关节炎7天后，再次测量膝关节以计算膝关节直径的百分比增加，并手术切除髌骨。用甲醛固定关节组织，经EDTA脱钙后，将膝关节包埋于石蜡中，制备4微米切片用于组织化学染色与分析。