JoVE 实验百科全书
免疫学
0 次观看 • 4:50 分钟 • July 8th, 2025
取一只携带移植人脑肿瘤的免疫缺陷型小鼠，并使其处于麻醉状态。
去除手术部位的毛发并进行消毒。在眼睛上涂抹眼膏以防止角膜干燥。
将小鼠置于立体定位仪上，并使用加热垫维持其体温。
在头皮上做切口，暴露颅骨。
定位颅骨上的前囟（bregma）这一解剖标志，并确定注射位点，将微量注射针置于其上方。
微量注射器中含有来自健康人供体的肿瘤特异性效应T淋巴细胞悬液。
在颅骨的注射位置钻孔，避免损伤脑组织。将针头插入脑内，并在肿瘤部位缓慢释放效应T淋巴细胞。
部分撤出针头并保持其位置，防止注射的细胞泄漏，然后再完全撤出针头。
缝合切口并让小鼠恢复。
通过脚趾夹捏确认动物已充分麻醉，然后去除两耳之间至鼻部手术区域的毛发。缓慢重悬细胞以防止细胞聚集，并小心将细胞悬液装入注射器，避免产生气泡。
然后，将注射器放入适配的注射泵中。用浸有5%聚维酮碘溶液的棉签消毒手术部位，并在小鼠眼睛内涂抹润滑性眼膏以防止角膜干燥。接着，将麻醉后的小鼠置于立体定位仪上，放置于恒温加热板上。将小鼠的鼻部和门齿正确置于门齿杆上方。将耳杆牢固地插入小鼠耳道以固定头部，注意避免损伤鼓膜。
抑制呼吸并确保头部充分固定。使用无菌剪刀沿颅骨上部正中矢状面做皮肤切口，暴露颅骨。确定矢状缝与冠状缝的交点，作为立体定位的解剖标志，并将注射器置于该点上方。
将注射器移至前囟旁2毫米外侧和0.5毫米内侧的预定坐标位置。使用微型钻机，用无菌钻头在颅骨上钻一个小孔。操作时需注意保持浅层，以避免损伤脑组织。
将注射器小心插入钻好的孔中。将针头缓慢向前推进至硬脑膜下3毫米处，然后回撤0.5毫米，最终深度为2.5毫米，再进行注射。
以每分钟 2 至 3 微升的速度进行细胞注射，并在整个注射过程中持续监测小鼠状态。注射完成后，将针头仅回撤 1 毫米，保持注射器位置不动，再额外停留 1 分钟，然后缓慢完全拔出注射器，以防止灌注部位发生渗漏。小心地将动物从立体定位仪上取下。
使用适当的外科缝线闭合皮肤，并将2%利多卡因凝胶直接涂抹于伤口处。将麻醉后的小鼠转移至预热至37摄氏度的加热垫上方的相应笼盒中，以维持小鼠正常的体温，直至其从麻醉中完全恢复。