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准备一只麻醉的小鼠供体,并将其置于仰卧位。沿腹中线做一切口以暴露腹腔。
将肠管外置以定位肾动脉下方的腹主动脉下段(IAA),该血管负责输送含氧血液。
将肠系膜前动脉(IAA)与携带缺氧血的邻近下腔静脉分离。
结扎靠近肠系膜上动脉(IAA)的小分支,并用夹子夹闭 IAA 以阻断血流。
切除适当长度的一段组织,并将其置于生理盐水中。
使用不同遗传背景的受体小鼠重复该操作步骤。
将供体 IAA 植入受体中,并匹配其解剖学方向。
通过缝合将供体移植物的末端与受体末端进行端对端吻合。
松开夹子,检查血流是否正常且无渗漏。将肠管放回腹腔内。接着,缝合切口部位。
该模型现已可用于研究针对移植的 IAA 移植物的免疫反应。
首先将供体小鼠仰卧位放置于洁净的薄型有机玻璃板上,该板用无菌布巾包裹,并置于手术显微镜下,放大倍数为8-30倍。
通过脚趾夹捏确认手术麻醉充分后,使用无菌剪刀从耻骨至剑突处做一条单一的正中切口。接着,使用小型牵开器打开腹壁,暴露腹腔。然后,使用无菌棉签轻轻将肠管向上并向动物左侧推移。用生理盐水浸湿的纱布覆盖组织,并将生殖器官向下移动,以定位肾下主动脉和下腔静脉(IVC)。
现在,使用5号医用镊子在左肾动脉靠近分叉处将主动脉与下腔静脉(IVC)分离。然后,使用10-0聚酰胺单丝缝线结扎靠近主动脉的小分支。当供体的主动脉和下腔静脉分离后,用生理盐水充分浸润血管。用湿润的纱布覆盖暴露的体腔,并将供体置于无菌区域备用。
现在,将受体小鼠置于显微镜下,参照前述方法将受体主动脉与下腔静脉分离。随后,在目标节段的近端和远端分别放置两个4毫米的微血管夹,间距约为5毫米。接着,使用Vannas-Tübingen显微剪刀做一个单一的水平主动脉切口,并切除不超过0.5毫米的腹主动脉,以容纳供体主动脉移植物。
将供体放回显微镜下,按上述方法横切一段3至4毫米的移植物。然后,使用25号5/8针头用肝素化生理盐水冲洗切除的主动脉,注意针头尖端不要接触血管,并将血管置于盛有肝素化生理盐水的容器中,置于冰上。
在切除后30分钟内,将供体主动脉移植物置于受体的原位,使移植物的解剖方向与受体对应结构一致。然后,轻轻夹住血管的外膜,使用5号镊子将其轻微外翻。接着,用镊子夹住连接在10-0聚酰胺单丝缝线上的针,穿透血管壁全层,将供体主动脉移植物固定于受体的切除血管处。
在进行连续缝合时,于移植物上下两端的9点钟位置放置固定缝线。随后,从移植物上端的3点钟位置开始,使用两条连续缝合线吻合切除后的血管断端,并将缝线固定于固定缝线上。接着,翻转移植物,继续沿血管背侧进行连续缝合,直至与起始的固定缝线相遇。打结时避免对血管施加过大压力,并以相同方法完成下端的吻合缝合。
吻合完成后,松开远端微血管夹,使血液经血管逆行流动。若未观察到出血,再松开近端的血管夹。若未观察到血流阻塞,用一对镊子轻轻夹住固定缝线的一端,轻柔地牵拉血管,以检查血管后壁,不应观察到皱缩现象。若供体与受体血管均显示出有力的脉动模式,可用棉签将肠管复位至腹腔内。
最后,使用持针器和格拉费镊子,以5-0聚丙烯缝线连续缝合关闭腹壁。采用皮内缝合方式,用相同的缝线关闭皮肤层。可通过观察后肢的运动功能来评估手术是否成功。