肿瘤类球体中浸润性T细胞的三维共培养模型

从含有琼脂糖凝胶的培养板开始。该凝胶包含一个接种室，内含多个微孔。

每个微孔中含有一个悬浮于培养基中的肿瘤类球体。这些类球体是由肿瘤细胞形成的三维细胞聚集体。

首先，移除琼脂糖凝胶周围的培养基。然后，从接种室的一角移除凝胶内部的培养基，以避免类球体丢失。

将肿瘤特异性T细胞悬液逐滴加入接种室中，使细胞沉降至含有类球体的微孔内。

接下来，在琼脂糖模具周围加入培养基，并在生理条件下孵育培养板，以建立共培养体系。

孵育期间，T细胞围绕在类球体周围。部分T细胞浸润进入类球体内部，而另一些则停留在外围，从而建立了一个三维共培养模型。

为建立T细胞共培养体系，将适当数量的T细胞重悬于每孔190微升的适宜T细胞培养基中，倾斜12孔板，先移除琼脂糖模具周围的细胞培养基，再移除接种室中的培养基，注意不要移走类球体。

使用光学显微镜检查是否有类球体被吸出，并将装有P200移液器的枪头置于每个凝胶块上方约0.5厘米处，小心地以逐滴方式将T细胞接种到凝胶块上，避免扰动类球体。当所有凝胶块均完成接种后，小心将培养板放回细胞培养孵育箱中孵育15分钟，随后在每个凝胶块外侧加入含有胎牛血清的新鲜细胞培养基，继续孵育48小时。