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免疫学
0 次观看 • 2:56 分钟 • July 8th, 2025
准备一只经过基因改造且缺乏细胞因子白介素-15表达的麻醉小鼠。
剃除背部 flank 区域的皮肤毛发,并涂抹脱毛膏以清除残留的毛干,从而在后续步骤中促进 DNA 更好地导入皮肤。
对背部皮肤表面进行消毒,并标记DNA转染的目标区域。
在标记的表面滴加少量编码白细胞介素-15的质粒DNA。
使用一束针灸针,反复穿刺标记的皮肤表面。
针束的刺入动作轻柔地振荡皮肤表面,松解最外层皮肤的死亡细胞。
此外,振动的针头会刮擦细胞的细胞膜,促进“针刺转染”(acufection),即通过针灸介导将DNA递送至细胞内,包括角质形成细胞和树突状细胞。
现在,让小鼠恢复。
皮肤中转染成功的细胞可产生白细胞介素-15蛋白。
将小鼠麻醉后,将其眼睛涂抹兽医眼科软膏以防止干燥。然后,剃除动物背部的毛发,并涂抹脱毛膏以溶解残留毛干中的角蛋白。脱毛后,用浸水的棉球擦去脱毛膏。
使用浸有70%乙醇的无菌棉签消毒皮肤表面,并用预先准备好的模板标记目标皮肤区域。将含有10微克质粒DNA的10微升DNA溶液涂抹于目标皮肤区域。进行小鼠针刺转染时,将针刺装置垂直于皮肤持握,反复穿刺指定区域,持续30秒内穿刺100次,或直至涂抹于皮肤上的溶液完全吸收。
为了在皮肤组织中实现质粒DNA的有效表达,重要的是避免过深地切入皮肤,并确保DNA溶液被充分吸收。
完成操作后,将小鼠置于加热垫上以维持其体温,直至从麻醉中恢复。当小鼠恢复足够意识后,将其放回笼中,并提供水和食物。在操作后的最初48小时内,密切监测小鼠是否出现不适症状,包括行为改变或外观异常。
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