一种体外评估肿瘤特异性CAR T细胞抗肿瘤活性的实验方法

取一个含有多孔板的B细胞淋巴瘤肿瘤细胞，该细胞表达B细胞特异性表面抗原和胞质萤光素酶。

将CAR T细胞加入选定的孔中并进行培养。这些细胞表达嵌合抗原受体（CAR），该受体包含靶向肿瘤抗原的胞外结构域和胞内信号传导结构域。

CAR 与肿瘤抗原结合，诱导 CAR T 细胞活化。

活化的细胞会释放细胞因子，促进细胞的抗肿瘤活性，进而触发毒素的释放。

毒素进入肿瘤细胞并诱导细胞死亡。

离心细胞并收集上清液。定量检测细胞因子以评估CAR T细胞活性。

将细胞重悬于含有荧光素（一种生物发光底物）的缓冲液中。

进入细胞后，荧光素在活体肿瘤细胞内被荧光素酶氧化，从而发出光。

通过检测生物发光信号，观察经处理的肿瘤细胞中信号降低，以确认CAR T细胞介导的细胞毒性作用。

首先，将10,000个同基因型的CD19阳性肿瘤细胞（表达或不表达荧光素酶）与100微升TCM加入至96孔圆底组织培养板的每个孔中。随后，向每孔加入10,000个CD19 CAR T细胞和100微升TCM。

按照文本方案中的说明设置对照组。将细胞在37°C、5%二氧化碳条件下共培养16至24小时。此后，以500 × g 离心5分钟。收集上清液用于进一步的干扰素-γ和白细胞介素-12 p70 ELISA分析。

将细胞沉淀重悬于 100 µL 含荧光素的 PBS 中，在 37°C 下孵育 10 分钟。然后使用发光仪检测每个孔的发光强度。