一种评估抗癌效果的检测方法 乳酸杆菌 无细胞上清液

取一个含有在生长培养基中的结直肠癌类球体的多孔板。

类球体是癌细胞的三维聚集体，能够模拟生理性的肿瘤微环境。

移除培养基，并加入浓度梯度递增的 Lactobacillus 无细胞上清液（LCFS），即从培养物中获得的培养上清液 乳酸杆菌， 消化道细菌

LCFS 不含细菌细胞，但含有细菌分泌的具有抗癌活性的代谢产物。

LCFS 中的细菌代谢物与类球体中的癌细胞相互作用，诱导细胞凋亡并导致细胞死亡。

细胞损伤导致球形结构形态的破坏。

使用显微镜观察经LCFS处理的球状体，可见随着LCFS浓度的增加，细胞死亡增多，表明细菌代谢产物具有剂量依赖性的抗癌活性。

进行LCFS处理时，将制备好的解冻LCFS储备液用新鲜培养基连续稀释至25%、12.5%和6%的浓度，并使用200微升移液器小心吸出每孔贴壁培养的结直肠癌细胞系中的大部分上清液。

然后每组癌细胞中轻柔加入 200 µL 含 LCFS 的培养基，每个样本设三个重复，将培养板放回培养箱继续培养 24 至 48 小时。