一种生成抗原特异性CAR T细胞的技术

取一个包被有重组纤连蛋白片段的微量培养板，加入活化的鼠源CD8阳性T细胞。

引入含有编码嵌合抗原受体（CAR）的转基因RNA的逆转录病毒载体。

用封板膜覆盖并用袋子密封，以避免污染。将培养板以低速离心，以促进病毒与细胞的相互作用。

纤维连接蛋白可结合病毒和细胞，使二者共定位，从而增强病毒介导的基因转移。

离心后，取出密封袋，并在生理条件下孵育该培养板。

病毒载体的包膜与细胞膜融合，释放出病毒RNA和酶。

病毒酶将释放的RNA逆转录，并将产生的DNA整合到宿主基因组中，从而使细胞能够表达表面结合的CARs。

CAR 包含一个针对目标抗原的特异性抗原结合域以及用于T细胞活化的信号传导域。

抗原特异性的CAR T细胞已准备好进行下游检测。

第1天，通过向24孔板的各孔中加入0.5毫升纤连蛋白，于4摄氏度孵育过夜，制备人纤连蛋白片段包被的培养板。

第二天，移除纤连蛋白溶液，每孔加入1毫升含2% BSA的PBS溶液。室温孵育30分钟，用1毫升无菌PBS洗涤处理过的孔。移除洗涤液后，该培养板即可使用。

使用台盼蓝计数活化的CD8 T细胞。通过离心收集细胞，并重悬于每毫升含500万个活细胞的培养基中，用于转导。将100微升活化的CD8细胞悬液加入纤维连接蛋白包被板的每孔中。然后，加入1.5至2毫升预先制备的含病毒培养基，通过轻轻旋转混匀，使细胞均匀分布。

将培养板密封在自封袋中，在37摄氏度下以2000 × g 离心90分钟。从离心机中取出培养板并转移至生物安全柜中。小心移除塑料袋，并确保培养板外表面未被培养基污染。将培养板转移至37摄氏度的二氧化碳培养箱中。

4小时后，从每个孔中移除1毫升培养基，加入1毫升预热的完全T细胞培养基，并将培养板放回培养箱中。