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免疫学
0 次观看 • 2:43 分钟 • July 8th, 2025
从含有带正电荷聚合物的冷冻聚合物溶液开始。
将聚合物溶液解冻至达到室温。
加入缓冲液并涡旋振荡以充分混匀，得到均一的溶液。
将目标 mRNA 以等比例加入聚合物溶液中，以获得最佳反应效果。
孵育，使带正电荷的聚合物与mRNA中的带负电荷的磷酸基团相互作用 通过 静电相互作用。
这有助于将 mRNA 掺入聚合物结构中，形成 mRNA-聚合物复合物或聚合物复合颗粒的纳米粒子。
将这些聚复合物转移至含有无RNase水的离心管中。
混合后，使多聚复合物沉淀。
加入含有蔗糖的缓冲液并将其冷冻。蔗糖作为冷冻保护剂，可维持聚合物复合物的结构完整性。
然后进行冷冻干燥，以去除任何残留的水分。
将其在低温下储存，作为 mRNA 疫苗候选物以供将来使用。
为形成聚复合物，将先前制备的聚合物C-6肽聚β-氨基酯解冻并涡旋溶液。用移液器将聚合物溶液上下吹打混匀后，用乙酸钠配制12.5毫摩尔的溶液。涡旋溶液并静置10分钟。
接下来，将 mRNA 准备成 0.5 毫克/毫升的浓度，并用移液器吹打混匀。再次涡旋振荡聚合物溶液。然后，在微量离心管中按 1:1 的比例将遗传物质溶液与聚合物溶液混合，并将该管在 25 °C 的加热块中孵育 30 分钟。孵育后，通过将样品加入含有 1 至 2 份无 RNase 水的微量离心管中，使混合物沉淀。
然后，为加入辅料，将20毫摩尔的HEPES和4%蔗糖溶液以与mRNA和聚-beta氨基酯混合物相同的体积加入，并用移液器混匀。冻干时，先将聚集体溶液在-80摄氏度下冷冻1小时，然后进行主干燥，随后立即在-20摄氏度下保存聚集体，以避免再水化。