构建具有抗HIV工程化免疫系统的人源化小鼠模型

准备一只麻醉的重度免疫缺陷受体小鼠。

切开组织以暴露肾脏，并在肾包膜上打孔。

取一支植入针，其中含有悬浮于明胶状蛋白质混合物中的人类胎儿胸腺组织和胎儿肝脏来源的细胞。

这些细胞包括经过基因改造的造血干细胞（HSCs），其表达针对 HIV 的嵌合抗原受体（CARs）。

将细胞悬液和胸腺组织植入被膜下，然后闭合切口。

接下来，通过眶后静脉注射表达CAR的造血干细胞，并让小鼠恢复。

在肾脏中，胶状蛋白质混合物聚合形成基质，将造血干细胞保留在植入部位。

基质造血干细胞迁移至胸腺，分化为功能性人类T细胞。

同时，经眶后静脉注射的造血干细胞可到达骨髓，并分化为功能性的人B细胞、单核细胞和自然杀伤细胞。

用于抗 HIV 人类免疫系统的小鼠模型现已准备就绪。

将胸腺组织块和培养基从烧瓶倒入60毫米培养皿中。将一些正向置换移液器吸头放入冰上预冷的1.5毫升无菌螺口管中进行冷却。同时，将细胞沉淀和一定体积的凝胶状蛋白质混合物（如Matrigel）置于冰上。

根据批准的动物实验方案，使用注射用麻醉剂对受体小鼠进行麻醉。通过捏压小鼠足爪检查其麻醉深度，若对捏压无反应，则表明已达到手术所需的麻醉水平。

将每只小鼠从髋部到肩部、背部中线至腹部的一侧剃毛。皮下注射稀释的卡洛芬，剂量为每千克体重6毫克，注射部位为肩部或腹股沟三角区。在直径60毫米的培养皿中用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗套管针的套管。使用一对钝头弯镊子，将一块来自60毫米培养皿的胸腺组织置于套管开口内侧，然后回拉套管针，将组织吸入套管内。

接下来，使用正向置换移液器和预冷的吸头，向含有细胞沉淀的离心管中加入 5 µL 冷的凝胶状蛋白混合物，轻轻搅拌以制备细胞悬液。将细胞悬液移入套管的开口中，并缓慢回拉穿刺针芯，以完成针头的装填。

用聚维酮碘对小鼠剃毛区域进行擦拭，随后用异丙醇擦拭，重复三次。确定皮肤下颜色最深的部位，该部位即为脾脏的位置。肾脏位于脾脏背侧约5毫米处。

通过观察足部捏夹无反应确认麻醉程度适宜后，使用弯头镊提起皮肤，并用手术剪在皮肤上平行于脾脏做一长度为15毫米的切口。随后，在下方腹膜层做类似切口。

在雄性个体中，肾脏易于观察，仅需按压腹部即可使其突出。用止血钳或一对弯头钝性镊子支撑肾脏。在雌性个体中，卵巢常阻碍肾脏的顺利取出。使用止血钳夹住卵巢，小心地暴露肾脏。

使用尖头镊子在肾包膜的后端轻轻戳出一个小孔。将套管针插入此孔，并沿肾脏滑动，直至套管的开口完全被肾包膜覆盖。轻柔地将套管下的组织推出肾包膜，并将套管缓缓撤出。使用弯头镊子确保胸腺组织块未随针头带出。

接下来，用镊子提起腹膜，并用止血钳轻轻将肾脏推回原位。使用外科缝线在腹膜上打一个双结缝合线。同时，放置两个自动夹钳夹子以闭合皮肤。

现在，混匀转导后的 CD34 阳性细胞，并用胰岛素注射器吸取 100 微升体积中含有 0.5 × 10⁶ 个细胞的悬液。通过小鼠眶后静脉注射将这些细胞注入小鼠体内。

注射后，将少量眼用润滑剂涂抹于每只眼睛，然后将小鼠侧卧放回笼中。在完成所有小鼠的植入手术后，确认动物已恢复意识并能够自主活动，再将其送回饲养室。