从骨髓干细胞生成质膜囊泡

0 views • 3:20 min • July 8th, 2025

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从骨髓干细胞培养开始。

引入胰蛋白酶-EDTA缓冲液以分离细胞并破坏细胞团块,形成单细胞悬液。

心,然后除去上清液。用新鲜培养基重悬沉淀。

悬浮液转移到注射器中并将其连接到膜过滤装置。

推动柱塞并丢弃含滤液的介质。

拆下过滤器。用新鲜培养基填充注射器。再次连接过滤器,然后快速推动柱塞。

液体的压力迫使池向过滤器孔隙移动。

这会产生球形质膜囊泡或 PMV。

这些囊泡包含被膜包围的细胞成分和细胞器。

倒置相差显微镜下检查滤液以观察半透明的球形囊泡。

囊泡的尺寸与滤膜的孔径相匹配,证实了PMV的产生。

为了产生PMV,首先,在37摄氏度和5%二氧化碳的加湿培养箱中,在六孔板的一个孔中培养小鼠PMSC在完整的DMEM培养基中培养。当细胞达到90%汇合度时,用0.5毫升无钙PBS冲洗孔,并用0.5毫升0.25%胰蛋白酶-EDTA分离细胞。

37摄氏度三分钟后,用手掌敲击板数次,以促进细胞解离,用1毫升培养基停止消化。将细胞转移到 5 毫升锥形管中进行离心,并将沉淀重悬于 4 毫升新鲜培养基中。然后,将细胞分在新的六孔板的两个孔之间,并将板放回细胞培养箱中24小时。

第二天,如刚才所示,通过胰蛋白酶消化从一个孔中收获细胞,通过离心收集后将沉淀重悬于0.5毫升新鲜培养基中。将细胞加载到 1 毫升胰岛素注射器中,并将注射器连接到过滤装置。快速按下柱塞,将细胞挤压过过滤器并丢弃挤出的培养基。然后,如刚才所示,通过过滤器装载并分配 0.5 毫升额外的培养基,从第二次挤出中收集培养基。

将 150 微升收集的培养基接种到 35 毫升玻璃底培养皿中,让囊泡沉降约 10 分钟。然后,使用20倍物镜在配备CCD相机的倒相衬显微镜下确认PMV的存在。

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Last updated: 18 July 2026