口服递送改造酵母细胞至小鼠肠道免疫系统

从含有基因转化的营养缺陷型酵母悬液的口服管开始，这些酵母无法产生尿嘧啶碱基。

将口腔导管插入固定小鼠的口腔，并引导其进入胃部。

将酵母悬液直接注入胃内，使其最终到达小肠。

小肠含有上皮细胞，其下方的派尔集合淋巴结富含免疫细胞。

微褶细胞是派尔集合淋巴结附近的一种特化的肠上皮细胞，可吞噬酵母细胞并将它们摄入囊泡中。

这些囊泡穿过细胞，将酵母细胞释放到下方的派伊尔集合淋巴结中。

从处死的小鼠肠道中分离派伊尔结，并获得单细胞悬液。

将该细胞悬液培养于含有尿嘧啶的酵母选择性培养基上。

营养缺陷型酵母利用尿嘧啶并增殖形成菌落，证实转化后的酵母细胞已递送至小鼠肠道免疫系统。

在按照文本方案制备酵母培养物后，使用血细胞计数板测定细胞浓度，并调整至每毫升10^9个细胞。在2,500 × g条件下离心收集细胞沉淀 g 三分钟。然后，倒掉上清液，加入适量无菌水重悬细胞，并轻轻吹打混匀。

将合适规格的灌胃针连接到1毫升无菌注射器上，并吸取酵母样品，排除所有气泡。另取一支注射器吸取无菌水，用于对照小鼠的灌胃。用非优势手抓取待灌胃的小鼠，用食指和拇指紧紧抓住其颈部周围的皮肤，将尾巴压在小指下。确保抓握牢固，防止小鼠头部活动。

接下来，将灌胃针轻轻插入小鼠食道，操作时将针头沿口腔顶部和咽喉后部推进，位置稍偏中线左侧。等待小鼠吞咽针头的膨大端。如果感到阻力或小鼠出现喘息，应轻柔地撤出针头，重新尝试寻找食道位置。

当小鼠吞下灌胃针的球部后，轻轻按压注射器活塞，将酵母直接注入小鼠胃内。轻柔地将灌胃针从小鼠胃和食道中取出，并将小鼠放回笼中。检查小鼠是否呼吸正常、活动自如，以确保灌胃操作成功完成。

按照文本方案处死小鼠后，将其腹部完全暴露朝上放置，并使用70%乙醇喷洒腹部区域。用剪刀穿过毛发和皮肤做一横向切口。然后手动撑开切口，进一步暴露覆盖腹腔器官的薄层浆膜——腹膜。轻轻提起腹膜，做一横向切口以暴露肠管。

然后，使用钝头镊子小心地将小肠从肠系膜动脉、脂肪及其他组织中分离出来。从小鼠腹部左上象限的胃部开始，沿小肠暴露至盲肠，即大肠起始处的较大肠组织袋状结构。

接下来，通过在小肠中寻找1至2毫米大小、大致呈圆形的不透明组织区域来分离派伊尔结。然后，使用弯头解剖剪剪除派伊尔结的穹顶部分，并留出边缘，以确保不收集周围组织。

将分离的派伊尔集合淋巴结转移至完全 IMDM 培养基中。随后，将含有悬浮派伊尔集合淋巴结的溶液倒入一个 40 微米的细胞筛中。用完全 IMDM 洗涤派伊尔集合淋巴结后，使用 1 毫升注射器的推杆轻轻研磨组织，释放细胞并收集至 50 毫升离心管中。在 1,800 转/分钟下离心 7 分钟，沉淀过滤后的细胞。随后静置，并根据文本方案对细胞进行分析。