0 次观看 • 3:12 分钟 • July 8th, 2025
以经非离子型表面活性剂处理的Mycobacterium bovis BCG悬液作为起始材料，以防止细菌聚集。
接下来，加入生物素化试剂并孵育。
这种生物素化试剂是由生物素与功能性连接臂形成的复合物，可介导生物素分子与细菌表面蛋白的结合，从而标记细菌。
孵育结束后，离心生物素标记的细菌悬液，以去除未反应的生物素化试剂。
将细菌重悬于缓冲液中。加入亲和素融合蛋白溶液，该重组蛋白包含与单体亲和素融合的目标抗原结构域。
孵育期间，亲和素与生物素结合，从而促进细菌表面用目标抗原进行修饰。
离心悬浮液以去除未结合的融合蛋白。
将抗原包被的细菌重悬于含有非离子型表面活性剂的缓冲液中。细菌表面的抗原包被可增强其触发免疫反应的能力。
由于卡介苗（BCG）属于二级病原体，操作时须在生物安全柜中进行，并使用个人防护装备。
为了对BCG细胞表面进行生物素标记，首先在摇床平台上将细胞培养至适当的密度。收集约10亿个细胞，使用500微升冰浴的无内毒素PBST缓冲液洗涤三次。然后离心沉淀细胞，并将其重悬于无菌、无内毒素的PBS缓冲液中。接着，用无菌滤过的水新鲜配制10毫摩尔的Sulfo-NHS SS生物素溶液。随后，将细菌与含有0.5毫摩尔Sulfo-NHS SS生物素的1毫升培养液在室温下孵育30分钟。
接下来，用500微升预冷的PBST缓冲液洗涤已标记的细菌三次，以去除未反应的试剂。然后，将菌体沉淀重悬于1毫升PBST缓冲液中。
将5亿个生物素标记的卡介苗与亲和素融合蛋白混合，使蛋白终浓度为每毫升10微克。在摇床中室温孵育1小时。随后，用500微升冰冻的PBST缓冲液洗涤细菌三次。