常温心脏骤停和心肺复苏术:缺血再灌注损伤的小鼠模型

该程序的总体目标是模拟 Norm Themic 整体缺血再灌注，以评估干预措施对这种重要且常见的疾病状态的影响。首先，准备用于心脏骤停和复苏或 ca CPR 的麻醉器械小鼠。下一次心脏骤停被诱导。

然后使用胸外按压和肾上腺素从心脏骤停中复苏小鼠。最终，可以进行功能测定，例如血尿素、氮、血清肌酐、Alan 转移酶、天冬氨酸到次要转移酶和组织学，以评估实质性器官损伤。也可以测量早期生物标志物的存在，例如中性粒细胞明胶相关的 lipo callin。

最后，这里评估了复苏的结果，证明为 24 小时经心脏、灌注和肾脏收获。与我们的其他方法（例如心脏骤停和心肺复苏的大型动物模型）相比，该模型的主要优点是实验室小鼠成本低、普遍存在并且可用于许多转基因菌株。首先，润滑麻醉小鼠的眼睛，并将动物仰卧在加热垫上。

然后用胶带固定动物的四肢，将后孔置于中立位置，但将四个孔尽可能靠近胸壁固定，以便在胸外按压期间允许整个胸壁偏移。接下来润滑并放置直肠温度探头。使用 22 号特氟龙导管和倾斜的导引器插管气管。

可以使用正压或负压来确认导管的气管内定位。使用正压，少量空气被迫进入管中。如果管子是气管而不是食管，则使用负压使胸部对称上升。

将少量液体放入连接到气管插管的透明管中。小鼠的自发呼吸努力使管道内的液体移动。用一圈铁丝将气管导管固定在门牙上，在门牙上保持轻微的张力，以便在胸外按压期间保持头部固定。

将啮齿动物通风机设置为 140 微升，每分钟 150 次呼吸，对鼠标进行机械通气。使用无菌技术和手术显微镜，将预冲洗的 PE 10 导管放入颈静脉中。用氰基丙烯酸酯手术粘合剂将 PE 10 导管固定到皮肤闭合处。

放置三个皮下心电图电极，一个靠近每个轴，一个在腹部的左下象限。确保所有电线都固定在作表面上。最大限度地减少信号交叉并最大限度地减少信号路径内的绝缘体。

连接后，优化显示器上的心电图信号。确保鼠标是 norm 主题。静脉注射 40 μL 室温、0.5 摩尔氯化钾，并观察心电图上的等电轨迹。

启动逮捕计时器。接下来，断开呼吸机并停止麻醉蒸汽。关闭加热垫和任何其他产生电子噪声并可能干扰心电图监测的设备。

在鼠标上盖上绝缘毯。在心脏骤停期间每分钟记录一次体温。如有必要，使用加热灯将中心温度调高到正常温度范围。

心脏骤停 7 分 30 秒后，重新连接呼吸机并将呼吸频率提高到每分钟 180 次。进行胸外按压以恢复自主循环是该模型最棘手的部分。鼠标非常小，因此定位和压力至关重要。

压力过大会导致肺和肝损伤，降低生存率。压力太小会降低自主循环恢复的可能性。胸部应从 ANA 行的三分之一压缩到二分之一。

在两次按压之间应允许后距离和完全后坐力。在该模型中未能实现生存几乎总是由于 CPR 在 8 分钟时不理想。以每分钟 300 次的速度开始胸外按压。

应用食指进行胸外按压。剑突上方 5 毫米，略偏中线输注左侧。将 0.5 毫升肾上腺素稀释至每毫升 15 微克。

在 CPR 的前 30 秒内，仔细观察心电图是否恢复自主循环或 ROSC，在前两分钟内观察到频繁的室性早搏和心电图轴的变化。ROSC 和几乎总是消退为稳定的窦性心动过速。在 2 分钟时，记录复苏总时间和肾上腺素剂量。

每分钟记录一次温度，持续 10 分钟。可以移除 R-O-S-C-E-K-G 导联后当自主呼吸开始时，通常在 ROSC 后 12 至 50 分钟内，拔除颈静脉导管并使用直接压力止血，当自主呼吸频率大于每分钟 60 次时拔管。最后，将鼠标放在手术后前两个小时设置为 37 摄氏度的温度受控表面上的恢复笼中，如果需要从麻醉中完全恢复，可以将笼子移动到标准的术后住房条件 C-A-C-P-R 麻醉小鼠后 24 小时，首先用生理盐水，然后用福尔马林进行跨式心脏灌注固定后， 进行剖腹手术以检查肾固定的充分性。

充分灌注和固定的肾脏漂白良好。心脏骤停会引起即时灌注丢失。压力在此处表示为平均动脉压或地图。

这种灌注压的损失导致阴影区域的整个心脏骤停期间区域肾皮质血流或 RR CBF 几乎完全停止。如图所示，胸外按压和肾上腺素复苏后恢复正常，RR CBF 在复苏后稳步上升。从这张图中可以看出，与接受假手术治疗的动物相比，接受 ca CPR 的动物术后 24 小时的血尿素氮或 BUN 血清肌酐以及肾小管细胞死亡的程度都显着升高 ca CPR 在这里诱导泛有机体缺血性损伤，肝功能酶的大量升高证明， 与假处理的动物相比，在 ca、CPR 小鼠中，Alan 转移酶或 LT 和天冬氨酸转化为 minoro 转移酶或 ST。

在这里，使用针对中性粒细胞凝胶相关脂肪卡其素或末端 gal 的多克隆抗体进行蛋白质印迹。显示了肾缺血性损伤的敏感指标。在 C-A-C-P-R 之前和之后 24 小时立即获得 4 只动物的尿样，表示 A、B、C 和 D.该图显示 C-A-C-P-R 后小鼠尿液中的 N gal 大幅上调。

该图显示了 ca CPR 后 24 小时肾组织短轴肺门切面的血染、托因染和 eoin 染色，但可以看到髓质和皮质髓质小管的明显损伤伴肾小管堵塞，在同一动物中可以看到同一区域的荧光玉 B 染色。C-A-C-P-R 后 24 小时可见于此图， 荧光玉 B 将坏死细胞染成亮绿色，显示斑片状皮质髓质微管蛋白坏死。这些发现与发生急性肾损伤或 KI 的人类的肾活检结果基本相似，也不同于 KI 的其他动物模型产生的结果，在尝试此程序时，重要的是要记住在休息前仔细放置鼠标，以尽量减少心电图信号噪音，并以最佳压力进行胸外按压。