通过膜片钳方法建立全细胞配置

0 次观看3:12 分钟 • July 8th, 2025

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首先将固定

的小鼠脑切片放置在充满人工脑脊液的电生理学装置的记录室中,以维持神经元活力。

该装置包含一个预组装的充满阳离子溶液的记录微量移液器,连接到放大器和压力控制单元。

在显微镜下,找到一个神经元并将微量移液器放置在其附近。

施加正气压以清除任何碎屑。

微量移液器移向神经元,直到膜上形成凹坑,表明神经元接近。

施加微弱的吸力以拉动微量移液器内的小膜贴片。

这形成了紧密的密封,增加了微量移液器的阻力,确认了稳定的密封。

细胞的电位维持在生理静息电位以实现细胞稳定性。

然后,施加短暂而强烈的吸力以破坏贴片膜,与细胞内部建立直接连接。

这种全细胞配置已准备好记录神经元电活动。

使用显微镜的精细聚焦轮,开始向下聚焦,同时逐渐降低微量移液器。始终先向下聚焦,然后将微量移液器降低到焦点平面,以确保微量移液器吸头不会突然渗透到切片中。当微量移液器与切片表面接触时,将显微纵器速度减慢至中低模式。轻轻施加轻微的正压以清除路径上的任何碎屑。

然后,通过交替使用 X、Y、Z 控制旋钮或对角线接近,其中两个 XZ 轴随着 Z 轴旋钮的旋转而改变。当微量移液器离细胞足够近时,细胞表面会出现一个凹坑。

现在,通过连接到移液器支架抽吸管的管子施加微弱而短暂的抽吸,以形成密封。当巨型密封形成时,使用计算机控制的放大器指挥器将细胞的保持电位提高到生理静息电位,以防止膜破裂后突然发生变化。千兆密封形成后,补偿快电容或慢电容。

这里非常重要的是,施加的吸力不要太强,否则膜可能会在建立密封之前破裂。

如果密封保持稳定,并且高于 1 吉欧姆,请施加短暂而强烈的吸力以破裂质膜。

吸力必须短暂,并且比建立密封时施加的压力更强,以便正确破裂膜并实现稳定的全细胞配置。

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最后更新:1 八月 2026