0 次观看 • 4:21 分钟 • July 8th, 2025
取一个聚合物涂层的多电极阵列（MEA），其上共培养的胚胎脊髓切片位于两个独立区域，可实现对两个切片的同时记录。
该切片显示了先前损伤区域中再生的神经连接。
将MEA放置于含有富含离子和营养物质的细胞外溶液的记录室中，以维持神经元的存活。
让系统稳定下来，以促进神经元的适应与通讯。
神经元之间的通讯 通过 称为动作电位的电信号，由MEA中的邻近电极记录。
每个电极的独立信号被整合，从而产生来自每个切片的电信号。
定期更换细胞外液以维持神经元的稳定性。
加入含有抑制剂的细胞外溶液，阻断神经元膜上的抑制性神经递质受体，使神经元保持更长时间的活跃状态。
比较两个切片的电活动。两个切片之间同步的电信号表明存在突触连接，并证实神经成功再生。
将一个装有包被微电极阵列的培养皿置于体视显微镜下。调节焦距使阵列清晰，并在电极阵列中央放置一滴六微升的鸡血浆。使用小刮勺，小心地将两片脊髓切片腹侧相对地滑入血浆液滴中。
接下来，在鸡血浆液滴周围加入八微升凝血酶。然后，用移液枪头小心混合并铺展鸡血浆与凝血酶的混合物。在鸡血浆与凝血酶混合物变得过于丝状并开始凝固之前，吸除多余的液体。随后，盖上培养皿盖，将其置于湿化 chamber 中。
将培养室置于37摄氏度的培养箱中约一小时。孵育后，小心向样品中加入10微升营养培养基。盖上培养皿盖，重新放入培养箱中继续孵育45分钟。接着，将每个多电极阵列培养组件放入滚筒管中，并加入三毫升营养培养基。 tightly 盖上管盖，将滚筒管放入滚筒中。在37摄氏度培养箱内以每分钟1至2转的速度旋转滚筒。
使用无菌橡胶头镊子，将多电极阵列培养组件从滚筒中取出，并置于体视显微镜下的培养皿中。调节焦距使组织清晰可见，确认两个组织切片已融合。接着，固定组件保持稳定，将手术刀片插入多电极阵列靠近组织切片处的凹槽内。保持刀片接近水平方向，然后抬起刀柄，同时使刀片仍保留在阵列的凹槽中，使刀片从底部向尖端滚动，切穿组织并覆盖凹槽。
必要时用25号针尖切断任何残留的组织连接。操作仅限于沟槽区域内，避免触碰娇嫩的边缘。将多电极阵列培养组件放回滚轴管中，并向培养物加入三毫升新鲜营养培养基。然后，将滚轴管放回培养箱中37摄氏度的滚轴鼓上。
将多电极阵列培养装置安装到记录室中，并向阵列上加入约 500 微升细胞外溶液。然后，将装置安装到显微镜上。等待 10 分钟使系统稳定，随后从每个活动检测电极记录 10 分钟的基础自发活动。重复记录共两次。
为确保细胞外环境稳定，每次记录结束后应更换细胞外溶液。如需解除网络抑制，可加入含有1微摩尔士的宁（strychnine）和10微摩尔加巴嗪（gabazine）的细胞外溶液，孵育至少两分钟后再记录电活动。