使用全细胞膜片钳技术研究荧光标记神经元的兴奋性

将固定好的转染小鼠冠状脑片置于记录室中，并用 aCSF 灌流。

该切片含有少量表达目标酶和荧光蛋白的锥体神经元。

组装一个记录电极，该电极包含内液溶液和连接至放大器的电极，用于测量神经元信号。

在显微镜下识别目标组织区域并定位荧光神经元。

向移液管施加正压以防止堵塞，并将其推进至目标神经元。

正压会在接触时导致神经元膜产生轻微凹陷。

释放压力，使膜与尖端之间形成紧密的密封。

将钳制电位设定在恒定的负值，以稳定神经元。

施加短暂的负压以破裂细胞膜，使细胞质与移液管内部连通，形成全细胞记录构型。

切换到电流钳模式，并施加正向电流脉冲，以产生表征神经元兴奋性的动作电位。

使用巴斯德移液管或小毛刷将脑片转移至记录室。用网格固定器压住脑片，并以每分钟2毫升的速度灌注人工脑脊液（ACSF）。为对GFP阳性神经元进行膜片钳记录，先在10倍物镜下通过显微镜定位目标区域，然后切换至60倍物镜寻找GFP阳性细胞。

接下来，用细胞内液填充记录电极。随后，将玻璃移液管放入移液管固定器中。然后，将移液管尖端置于浴液中，并对准尖端进行聚焦。一旦移液管进入浴液，即通过后端压力控制系统施加正压。

在显微视觉引导下接近目标细胞，同时保持移液管内的回压。当细胞表面出现微小凹陷时，释放压力。此时可能形成电阻大于1 GΩ的紧密封接；若未形成，可施加轻微负压以促进封接。

在形成封接的同时，将电压钳制电位调至负60毫伏。一旦形成吉欧姆封接，施加短暂的吸力脉冲以破裂细胞膜，进入全细胞记录模式。进入全细胞模式后，从电压钳模式切换至电流钳模式并开始记录。