0 次观看 • 4:01 分钟 • July 8th, 2025
将麻醉后的新生仔猪固定在立体定位仪上。
做正中切口以暴露颅骨。
移除部分颅骨，然后去除硬脑膜以暴露大脑。
将微电极阵列（MEA）固定到立体定位仪框架上。
MEA 由刚性轴和记录位点组成，记录位点包括涂有谷氨酸氧化酶的谷氨酸敏感位点，以及涂有非活性蛋白质基质的哨点位点。
将MEA垂直置于手术区域上方，并在头皮下放置一个伪参考电极，以获得稳定的基线电压参考。
将MEA插入目标脑区并开始测量。
记录位点上的谷氨酸氧化酶将细胞外脑内谷氨酸转化为过氧化氢，后者在电极表面发生电化学氧化，产生电流。
哨点监测站测量背景噪声。
将谷氨酸敏感位点信号与哨点位点信号进行归一化，以测量麻醉状态下的脑内谷氨酸水平。
首先，沿颅骨中线做一个4至6厘米的切口，注意避免使用手术刀划伤颅骨。切开后，采用轻柔牵拉和钝性分离的方法将头皮从颅骨上剥离。
接下来，用纱布轻轻擦拭颅骨以去除任何结缔组织，并暴露缝线。然后，确定开颅手术的预定位置。如果感兴趣区域仍被遮挡，可进一步牵开头皮。
现在，使用外科钻头在目标结构上方制作一个约 0.25 平方厘米的颅骨开窗。注意不要损伤硬脑膜或其下方的脑组织。根据需要，使用精细的外科工具切除覆盖在脑组织上的硬脑膜。操作时需格外小心，避免损伤脑组织。
本实验采用一种先前描述过的基于酶的微电极阵列，该阵列预先包被了谷氨酸氧化酶，并通过电沉积镀上了MPD。微电极阵列具有40毫米长的刚性轴，专为幼猪实验定制。将金属臂固定至显微操作器上，然后尽可能垂直地将微电极阵列置于前囟上方。
然后，小心地将电极阵列尽可能下放，但不要接触颅骨表面，同时记录前囟的坐标。接着，利用仔猪脑图谱确定目标结构的精确立体定位坐标，再相应地调整微电极的位置。
接下来，将伪参考电极置于头皮下方，确保其与动物体接触。随后，缓慢将微电极阵列插入脑内，至接近适当深度。在最后2毫米的进针过程中，使用液压微驱动装置轻柔地将阵列降至目标脑区，以尽量减少对组织的损伤。
微电极阵列定位后，等待30分钟，使电极达到基线状态，然后进行约三小时的测量。如果仔猪需在实验后存活，在采集数据后关闭切口。