0 次观看 • 3:04 分钟 • July 8th, 2025
首先将带有连接管路的微量移液器固定在显微操作器上。
将管路的另一端连接至装有盐缓冲液的注射器 通过 带可旋转阀门的连接器
将注射器置于适当高度,以提供足够的压力,从而在轴突中诱导出串珠样变性。
轴突曲张体是沿轴突长度方向出现的珠状膨大结构。
将微量移液器置于相对于培养皿的所需角度。
使用显微镜的荧光光源对准微移液管尖端,并将其降低至含有盐缓冲液的细胞培养皿表面附近。
现在,打开透射光源并关闭荧光滤光片。
将带有神经元的盖玻片放置到培养皿中。
首先,聚焦于微量移液器并调整其位置。
然后,聚焦于包含目标神经元的区域。
打开阀门以施加流体压力。这种微机械刺激可诱导这些神经元产生串珠样突起。
在此操作中,将移液管插入显微操作仪的螺口顶端以固定其位置。使移液管与细胞培养皿表面呈45度角。打开荧光滤光片,打开光圈,并确保可通过物镜观察到荧光亮点。
使用显微操作仪,将移液管移动至使其尖端与荧光点对齐的位置,并将移液管下放至略高于细胞培养皿表面的位置。到位后,打开透射光源并关闭荧光光源。用镊子将一块载玻片从细胞培养板转移至含有2毫升 Hank's 缓冲液(室温)的细胞培养皿中,转移时确保细胞面朝向移液管。
使用细调焦旋钮和20倍物镜,将焦平面调至细胞上方约四整圈的位置。随后,利用显微操作器移动移液器尖端,使其通过目镜观察时位于该焦平面的左侧中央并清晰对焦。移液器定位后,将显微镜重新对焦至包含目标区域的焦平面。
在7DIV的成像中,转染了GFP的小鼠海马神经元显示了喷 puff 前后的轴突情况。
本文介绍了一种利用微移液管和流体压力在神经元中诱导轴突串珠状突起的方法。该过程包括精确放置微移液管,并施加盐缓冲液以刺激神经元。
机械诱导的轴突串珠样变模型可使生物制药团队研究神经元对物理应激的反应,支持神经退行性疾病和损伤研究中的早期靶点验证。定量诱导和可视化串珠样结构为评估神经元的脆弱性与韧性提供了可控系统,有助于提高对疾病相关通路的预测可信度。该方法可在中枢神经系统产品线资产发现的关键阶段增强机制层面的风险评估。
这种微机械诱导方法适用于中枢神经系统研究中从早期发现到先导化合物鉴定的连续过程,为假设验证和表型筛选提供了平台。
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最后更新:29 八月 2026