通过微机械刺激在神经元中诱导轴突串珠样膨大

0 次观看3:04 分钟 • July 8th, 2025

首先将带有连接管路的微量移液器固定在显微操作器上。

将管路的另一端连接至装有盐缓冲液的注射器 通过 带可旋转阀门的连接器

将注射器置于适当高度,以提供足够的压力,从而在轴突中诱导出串珠样变性。

轴突曲张体是沿轴突长度方向出现的珠状膨大结构。

将微量移液器置于相对于培养皿的所需角度。

使用显微镜的荧光光源对准微移液管尖端,并将其降低至含有盐缓冲液的细胞培养皿表面附近。

现在,打开透射光源并关闭荧光滤光片。

将带有神经元的盖玻片放置到培养皿中。

首先,聚焦于微量移液器并调整其位置。

然后,聚焦于包含目标神经元的区域。

打开阀门以施加流体压力。这种微机械刺激可诱导这些神经元产生串珠样突起。

在此操作中,将移液管插入显微操作仪的螺口顶端以固定其位置。使移液管与细胞培养皿表面呈45度角。打开荧光滤光片,打开光圈,并确保可通过物镜观察到荧光亮点。

使用显微操作仪,将移液管移动至使其尖端与荧光点对齐的位置,并将移液管下放至略高于细胞培养皿表面的位置。到位后,打开透射光源并关闭荧光光源。用镊子将一块载玻片从细胞培养板转移至含有2毫升 Hank's 缓冲液(室温)的细胞培养皿中,转移时确保细胞面朝向移液管。

使用细调焦旋钮和20倍物镜,将焦平面调至细胞上方约四整圈的位置。随后,利用显微操作器移动移液器尖端,使其通过目镜观察时位于该焦平面的左侧中央并清晰对焦。移液器定位后,将显微镜重新对焦至包含目标区域的焦平面。

在7DIV的成像中,转染了GFP的小鼠海马神经元显示了喷 puff 前后的轴突情况。

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最后更新:29 八月 2026