电压响应的电生理记录 黑腹果蝇 视网膜光感受器对光刺激的反应

将一只黑腹果蝇（Drosophila）固定在夹持器上，使其头部暴露。

在一侧眼球上创建一个开口，并移除角膜以暴露视网膜。

将支架放置在记录平台上。

将含有生理盐水溶液的钝性参考电极插入头囊中。

接下来，将含有模拟细胞内环境溶液的锋利记录电极通过开口插入视网膜中。

使眼睛适应暗环境。

测量记录电极的电阻，以确保其适用于记录。

然后，消除记录电极与参考电极之间的基线电压差异。

在暗适应过程中，视网膜感光细胞中的特定离子通道保持开放状态，允许正离子持续内流。

用闪光刺激眼睛。

作为响应，离子通道关闭，减少正离子内流并促进外流。

因此，感光细胞的膜电位变得更负，记录电极将其测量为电压的下降。

操作微电极放大器时，务必通过触碰法拉第笼或防震台的金属表面进行接地，以防止静电荷积累。将固定好的果蝇牢固地固定在果蝇制备平台的支架上。

旋转果蝇固定装置，使果蝇的左眼正对实验人员。接着，使用一个小型粗调显微操作器，将钝头参考电极轻轻穿过果蝇的单眼插入头囊。务必确保果蝇仍保持健康状态，并能活动其触角。只有制备效果极佳时，才值得进行记录。

现在，将尖锐的记录微电极通过覆有胶状物的开口插入左眼。当电极进入组织时，其尖端位置可通过反射图案清晰辨识。由于电极尖端极为脆弱，必须精准引导，否则极易折断，操作难度很高。

根据所记录的细胞类型，果蝇头部的朝向应略有不同。将电极放置到位后，打开微电极放大器。然后关闭冷光源，将其从电源插座上拔下，并连接到中央接地端，以尽量减少由接地回路引起的电噪声。

接着，调节鹅颈式导光管，使万向臂系统能够自由地围绕果蝇移动。然后，关闭室内灯光，使果蝇标本处于相对黑暗的环境中。现在，测量眼内记录电极的电阻，其阻值必须在 100 至 250 兆欧之间。

接下来，将放大器设置为电流钳制或电桥模式，并将电极间的电压调零。在果蝇暗适应数分钟后，使用压电步进器或轻轻旋转微调旋钮，以0.1至1微米的步长将记录电极尖端插入眼睛。

每一步骤中，用持续时间为1至10毫秒的闪光刺激眼睛。每次闪光将引起电压的短暂下降，即视网膜电图（ERG）的波谷。