小鼠脑切片中重编程神经元的电生理记录

0 次观看2:14 分钟 • July 8th, 2025

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注含氧缓冲液的记录室中取固定化的基因工程小鼠冠状切片。

该切片包含纹状体区域,该区域具有从少突胶质细胞前体细胞重新编程的中间神经元,该细胞以中间神经元标记物和荧光蛋白表达为标志。

组装一个记录移液器,该移液器由浸入细胞内溶液中的电极组成。

微镜下识别荧光中间神经元。

保持移液器中的正压并将其推进到目标中间神经元,接触膜。

施加负压以形成高阻力密封。

施加负压脉冲以破坏膜,建立全细胞配置。

中间神经元的膜电位维持在恒定的负值。

施加短暂的增量电流,打开离子通道并改变膜电位,触发动作电位。

最终,膜恢复到静息电位。

观察膜电位响应电流注射的这些变化,表明神经元成熟和成功重编程。

一个组织切片转移到用于电生理学的记录室后,将玻璃移液器安装在记录电极上,并将其放入溶液中。仔细检查电极的电阻。然后,用移液器慢慢接近重新编程的细胞,在电极中保持轻微的正压以避免堵塞尖端,并在贴片前检查细胞是否为GFP阳性。

电池被贴补时,将电池保持在负60至负70毫伏的电流钳位中,并以10皮安的增量注入负20至正90皮安的500毫秒电流,以诱导动作电位。这表明神经元成熟和成功的重编程。

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最后更新:1 八月 2026