0 次观看 • 3:45 分钟 • July 8th, 2025
将大鼠脊髓切片放入记录室，并用组织固定器固定。
用人工脑脊液灌注脑片。
在显微镜下，辨认透明的胶状质（substantia gelatinosa，SG）区域，并选择一个健康的SG神经元。
将装有离子溶液的膜片电极移至神经元附近。
施加轻微的正向压力，以清除移液器吸头中的任何碎屑。
将移液器移向神经元。
然后，释放正压以在神经元膜上形成凹陷，从而形成封接。
调整钳制电位，使其接近静息膜电位（RMP）。
用短暂的负压吸破膜，形成全细胞构型。
在静息膜电位下，施加去极化电脉冲。
这些脉冲打开电压门控钠通道，允许钠离子快速内流。
这种离子内流会触发动作电位，导致神经元放电。
记录神经元的放电模式。
为对胶状质（SG）神经元进行全细胞膜片钳记录，应使用基于钾离子的细胞内记录液；仅在记录抑制性突触后电流时，使用基于铯阳离子的记录液。
轻柔地将脊髓切片移至记录室，然后用带尼龙线的U形铂丝将其牢固固定，以获得最佳的切片稳定性。在室温下用充氧的ACSF持续灌流切片，灌流速率设定为每分钟2至4毫升，以实现充分的氧合。
然后，使用低倍显微镜物镜识别脊神经节（SG）神经元区域，该区域呈半透明带状。在高倍物镜下选择一个健康的神经元作为目标细胞，健康神经元的特征是具有三维形态、明亮且光滑的膜，并将其调整至视频显示器屏幕中央。
用适量的基于钾离子或铯离子的细胞内液填充微量移液器。然后将微量移液器插入电极夹持器中，并确保细胞内液与夹持器内的银丝接触。调节微量移液器至成像清晰，使用显微操作器将其浸入ACSF中。施加轻微的正压以排除任何杂质和碎屑。
逐渐将微量移液器移向目标神经元。当移液器接近神经元，并在神经元膜上形成微小凹陷时，释放正压以形成吉欧封接。将钳制电位调整至负70毫伏，该数值接近细胞的生理静息膜电位。
然后，对微电极施加短暂而轻柔的负压，以击穿细胞膜并形成良好的全细胞记录构型。在电流钳模式下，于静息膜电位处施加一系列持续1秒、强度从25至150皮安、以25皮安为增量的去极化电流脉冲，检测每个神经元的放电模式，记录其放电特性。