长时间孵育后小鼠脑切片中神经活动的测量

将小鼠脑切片固定在记录室中，经长时间孵育后，用充氧的人工脑脊液（aCSF）灌流。

通过加载钙离子指示剂使切片中的细胞便于进行细胞内钙离子浓度的测定。

取一支包含电极的电解液记录电极管  溶液

确定目标神经元。在细胞膜上施加正压，将记录电极移至目标位置，使膜表面形成凹陷。

施加负压以形成紧密密封。

此外，施加负压脉冲，使膜破裂，形成全细胞记录构型。

灌注含有高钾浓度的 aCSF，使神经元膜去极化。

去极化打开钠离子通道，引发动作电位，进而激活电压门控钙离子通道，使钙离子内流。

钙离子与指示剂结合，增强荧光信号，可在适当光照下观察到。

由钾离子施加后钙离子内流引起的细胞内荧光增强，表明神经元在长期孵育后的存活能力。

进行记录时，将组织置于显微镜下的浸没式记录 chamber 中，并以每分钟 4 至 5 毫升的流速灌注含氧人工脑脊液（aCSF）。使用定制的网格固定装置固定组织。接着，使用微电极拉制仪制备若干记录电极，使其最终电阻达到 5 至 6 兆欧姆。

用移液管吸取3至4微升胞内液，然后将溶液置于冰上。接着，在红外微分干涉相差（IR-DIC）显微镜下通过CCD相机观察细胞。使用显微操作器将移液管定位在细胞膜上。通过移液管夹持器上的吸力口维持正压。当移液管接触细胞后，施加轻柔的负压以形成吉欧姆封接。

然后，通过短暂的负压破裂细胞膜。接着，开始全细胞电流或电压钳制记录。对于流式4的单一激发波长，使用460至490纳米的带通滤光片过滤激发光，并使用515至550纳米的带通滤光片过滤发射光。