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神经科学
0 次观看 • 3:20 分钟 • July 8th, 2025
从一个包含固定小鼠结肠段的电生理实验装置开始,该结肠段置于平衡电解质溶液中。
结肠具有一个暴露的主要盆腔神经节,并带有一条预先解剖出的结肠传入感觉神经分支,该分支负责将信号从结肠传递至大脑。
结肠两端均用三通阀进行插管,用于生理盐水灌注。
填充记录电极并将其置于传入神经附近。
施加轻微负压,将神经拉入电极内,形成紧密封接。
监测神经电活动的基线信号以及结肠内部压力。
在持续向结肠内灌注生理盐水的同时,关闭出口导管上的夹子。
这会导致结肠内压力逐渐升高,引起结肠扩张,并刺激传入神经。
重新记录神经信号和结肠压力。
随着压力增加,神经信号逐渐增强,证实了传入神经受到刺激。
在解剖显微镜下检查一支预先拉制的玻璃移液管。使用一对镊子折断电极尖端,使其尺寸与待记录神经的直径相匹配。随后,通过将尖端靠近打火机火焰进行打磨,形成斜面。
初次使用该方法的研究人员可能会发现,将电极尖端打磨成与神经尺寸相匹配的斜面较为困难。
接下来,将斜面电极放入电极夹持器中。然后,将一个10毫升的注射器连接到夹持器的侧端口,用于向电极施加负压或正压。之后,将夹持器连接到生物放大器的前置放大头级,并将头级安装到操纵器上。
随后,将电极移至组织浴槽中,并通过施加轻柔的负压,用克雷布斯(Krebs)溶液填充电极,直至溶液与电极 holder 中的银丝接触。接着,将电极尖端靠近神经的切断端,并施加负压,将神经吸入电极内。然后,进一步增加负压,使约 1 毫米长的神经被拉入电极中,并形成紧密的封接。
现在,打开生物放大器,并将滤波器设置为 300 至 3,000 赫兹。在示波器上监测信号,并使用 Spike Data 处理软件记录神经信号和管腔内压力信号。接下来,通过关闭出口套管上的三通阀并持续进行管腔内灌注,对结肠施加斜坡式扩张。持续监测管腔内压力,直至其达到 60 毫米汞柱。