记录神经元-星形胶质细胞共培养物中神经元网络的电生理活性

从多电极阵列或 MEA 板开始。每个孔都包含一个位于中央的电极阵列。

阵列涂有培养底物以促进细胞粘附。

在阵列上添加运动神经元和星形胶质细胞的悬浮液作为液滴。

孵育以允许细胞附着，然后加入补充有维持细胞活力的小分子的温热共培养基。

孵化过程中，星形胶质细胞分泌促进神经元成熟和突触形成的因子，从而形成神经元网络。

生理条件下将MEA放入记录装置中以监测神经元活动。

神经元传输电信号，称为动作电位，沿着轴突传播。

到达突触后，信号触发神经递质释放，将信号传播到下一个神经元。

每个孔内的电极在细胞外记录突触连接的神经元产生的信号。

同步节律电信号的检测证实了神经元网络的建立。

在电镀当天或之前，首先用水或PBS稀释PLO开始涂覆24孔MEA板。然后，向每个孔中加入15至20微升PLO，在孔中心形成液滴，覆盖电极区域，确保移液器吸头不会损坏电极。

隔间周围的孔中加水，确保足够的湿度，并将 PLO 在 37 摄氏度下孵育 1 至 2 小时。然后，使用塑料微量移液器吸头，在不接触电极的情况下吸出尽可能多的 PLO。接下来，用 250 微升水清洗井，三次。

使用移液器吸头，尽可能多地去除水，并在取下盖子后让表面干燥。接下来，加入 15 至 20 微升稀释的层粘连蛋白以覆盖每个电极阵列。在湿度隔间中加水并盖上盖子后，在 37 摄氏度下孵育至少两个小时，最多过夜。

铺板当天，用PBS冲洗运动神经元和星形胶质细胞培养物一次后，加入0.05%胰蛋白酶，在37摄氏度下孵育约5分钟，以提升细胞。将细胞收集到含有胰蛋白酶抑制剂的 15 毫升锥形管中，并用培养基或碱液洗涤板以确保收集所有细胞。

通过离心沉淀细胞，然后使用 1,000 微升移液器，用含有 20 微摩尔 ROCK 抑制剂的共培养基重悬运动神经元和星形胶质细胞，以生成 1 毫升单细胞悬浮液。使用血细胞计数器，计数运动神经元和星形胶质细胞，并在计数时盖上细胞悬液并将它们放入 4 摄氏度的聚苯乙烯泡沫塑料架中。

1 毫升两种细胞悬液以 300 倍 g 离心 5 分钟。计算所需的体积，然后重新悬浮颗粒。将所需体积的神经元和星形胶质细胞悬浮液以相等的比例混合，并通过移液两次轻轻混合以彻底混合。

然后，从板的每个孔中取出层粘连蛋白，并将 10 微升最终组合细胞悬液转移到每个孔中，形成覆盖电极阵列的小液滴。将板与未受干扰的细胞液滴在 37 摄氏度下孵育 20 至 30 分钟，以在板上形成初始附着物。

然后，将250微升含有ROCK抑制剂的温共培养基移液到每个孔的壁上，并在每个孔的相对壁上移液相同体积，并将板在37摄氏度下孵育24至36小时。第二天，检查板是否有碎片或死细胞，如果需要，将培养基更换为含有ROCK抑制剂的新鲜共培养基。

否则，从共培养第2天开始，使用不含ROCK抑制剂的共培养基每周进行两次半培养基交换。要进行记录，请在共培养第 1 天后尽快开始，将温度设置为 37 摄氏度，二氧化碳设置为 5%。然后，将板转移到记录机上，并在记录前平衡至少五分钟。根据实验设计，每隔一天或每周记录一次基线活动，超过 1 至 15 分钟。