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将麻醉后的小鼠固定在含有加热垫的立体定位仪上,以维持其体温。
涂抹润滑剂以防止眼睛干涩,并皮下注射电解质溶液以维持水分。
去除头皮上的毛发,对区域进行消毒,并皮下注射镇痛剂以减轻疼痛。
进行切口以暴露颅骨,然后清洁颅骨,使解剖标志清晰可见,以便识别脑区。
涂抹牙科粘合剂,并使用固化灯照射使其硬化,以辅助电极植入。
在海马体和小脑上方钻孔,并使用立体定位仪上的固定装置安装电极组件。
双极电极记录海马体的活动,而参考电极则从小脑获取基线活动。
插入电极,用牙科水泥固定组件,并从支架上取下。
再次给予电解质溶液和镇痛药。
在进行电生理记录之前,让小鼠完全恢复。
手术开始前,记录8周龄VGAT-Cre小鼠的体重。随后将动物放入诱导室中进行麻醉诱导。将麻醉后的小鼠置于37摄氏度的加热垫上。若使用反馈控制的温控系统,需将温度探头插入动物直肠,以在手术期间监测体温。开始手术时,将吸入麻醉气体流量切换至鼻罩,通过将小鼠上门齿轻轻置于门齿杆上,并将鼻罩移至其鼻部,然后将耳杆插入双耳并固定于立体定位仪框架上,完成动物的固定。
确保动物头部水平居中,轻微探触时无法移动。动物固定后,注射 0.5 毫升 Normosol 溶液以维持小鼠的水合状态,并涂抹眼用润滑剂以防止角膜干燥。通过夹捏后肢脚趾监测麻醉深度。若动物无缩足反射,即可开始去除手术区域周围头皮的毛发。操作完成后,使用乙醇和碘伏交替消毒清洁的皮肤区域三次,最后一次使用碘伏,随后皮下注射 0.05 毫升 0.25% 布比卡因。
使用手术刀在颅骨上做一个切口,然后用手术剪剪除一部分皮肤,暴露颅骨。用棉签将颅骨表面的结缔组织清理干净之前,先将皮肤拨至一侧。使用无菌棉签蘸取过氧化氢清洁颅骨,使颅骨缝、前囟点(bregma)和后囟点(lambda)清晰可见。将立体定位仪固定的钻头移至前囟点,将 x、y 和 z 坐标归零,然后抬起钻头并移动至后囟点,测定其坐标,以确认头部是否水平。
彻底干燥颅骨后,使用涂抹工具在颅骨上滴加一滴自酸蚀牙科粘合剂。用牙科紫外灯照射40秒以固化粘合剂,照射前等待60秒。光亮的表面表明粘合剂已与颅骨有效交联。使用直径0.031英寸的钻头,在每侧颅骨上小心钻出两个孔,转速为每分钟5,000转(RPM),注意避免钻入脑组织。滴加一滴生理盐水以辅助钻孔过程。如需植入海马深度电极,钻孔位置应位于前囟后方3毫米、外侧3毫米处。
在小脑上方、人字缝后方6毫米、前囟后方6毫米、中线外0毫米处钻一个孔,用于放置参考电极。接着,将装有电极的六针基座安装到立体定位仪的电极 holder 上。通过将电极对准相应的钻孔位置,缓慢降低并调整头戴装置,使两个双极电极的尖端准确地位于左侧和右侧海马钻孔的正上方;如有需要,可调整参考电极,使其悬停在小脑上方的钻孔处。
当海马扭曲电极位于孔洞正上方时,将 z 轴归零,然后缓慢将电极下降至左右海马体内部 3 毫米处,并将参考电极引导至小脑上方的孔洞中。在混合碗中混合粉剂和液体以制备牙科水泥,然后用牙科水泥覆盖颅骨表面、电极以及颅骨表面与基座底部之间的间隙。
待水泥干燥并硬化后,将电极固定器从立体定位仪机械臂上取下,抬起机械臂,并将固定器从底座上移除。皮下注射酮洛芬和乳酸林格氏液后,将小鼠从立体定位仪框架中取出,转移至动物房笼具内的加热垫上。待小鼠完全清醒后,将其单独放回动物房笼具中,给予软质食物喂养,并在术后72小时内每日监测体重变化。