利用电生理记录评估共培养体系中的神经连接形成

将含有共培养物的盖玻片置于灌流含氧细胞外溶液的记录室中。

共培养体系包含星形胶质细胞、表达与荧光蛋白融合的光敏感离子通道的大鼠皮层神经元，以及表达另一种荧光蛋白的诱导多能干细胞来源神经元。

使用共聚焦显微镜识别荧光标记的诱导多能干细胞来源的神经元。

将充满细胞内液的记录电极移向神经元，以建立全细胞记录模式。

保持恒定的负膜电位以获得准确的电流测量结果。

用光照射共培养体系，以激活皮层神经元中的光敏离子通道，从而产生动作电位。

动作电位引起神经递质释放到突触间隙中。

如果存在突触连接，神经递质会结合到膜片钳记录的iPSC来源神经元上的受体，打开离子通道并产生突触后电流。

在光刺激后，iPSC 来源神经元中突触后电流的增加证实了其与皮层神经元之间存在突触连接。

使用配备60倍水浸物镜的共聚焦显微镜。在室温下，用持续通入95%氧气和5%二氧化碳的外部溶液灌流细胞。用内部溶液填充记录微电极。

进行光遗传学刺激时，对表达tdTomato的细胞进行全细胞膜片钳记录，并将电压钳制在负70毫伏。使用全场汞灯配合480/40 nm激发滤光片，对整个视野进行30秒的刺激。记录通过光刺激表达ChR2的突触前皮层神经元所诱导的膜片钳细胞的突触后电流（PSCs）。